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blueghost2

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 1938223
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专业: 蛋白质组学

[求助] 测序问题

我做的实验是重组载体的构建，双酶切验证都是对的，然后测序测了好多次，每次都是说有重叠现象导致不能测序，我问测序公司什么是重叠现象，他说样本中干扰较大测序失败，真是纠结都测了一个多月了，那位高人指点一下啊！！！！！！急急急！！！！！

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1楼 2013-10-09 10:39:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

MolEPI: 2
应助: 9 (幼儿园)
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虫号: 877127
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性别: GG
专业: 肿瘤化学药物治疗

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
blueghost2: 金币+5, ★有帮助 2013-10-10 10:27:47
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-10 12:21:12

引用回帖:

5楼: Originally posted by blueghost2 at 2013-10-09 17:57:09
应该不是，我PCR验证时的条带就一条，你能自己测序？...

我们实验室有部分实验会涉及检测突变情况，所以我们自己有2台测序仪器。我看了楼上说的，其中第二点，如果PCR产物很干净，那测序基本就不会有问题，可排除；至于回纹结构，那个更不是问题了，我经常检测B细胞S区和V区的突变情况，基本上属于重复序列最多的sequence，的确回纹结构以及重复序列会产生干扰，但是不会完全测不出来，我觉得也不太可能是这种情况。想来想去，觉得只有这种分子量基本一致的isoform，或者是你样本不纯。