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lantianjesus

新虫 (小有名气)

[交流] 做吸附材料时，出现了很多问题，希望高手提供宝贵意见 已有4人参与

以前从未接触吸附领域，很多都不懂，近期实验出现了很多问题，希望虫友指教：
1. 我用紫外法测吸附蛋白质浓度，结果做了好几次，吸附后比吸附前浓度还大，蛋白质溶液用实验室超纯水机产水配置，PH6.6。是不是必须用缓冲液呢？用哪种缓冲液比较好呢？
2. 再做蛋白质标准曲线时候，我是用1mg/mlBSA溶液，稀释不同倍数（约0-1mg/ml）后侧OD值，为什么线性很差呢？呈指数形式。
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1楼 2013-10-08 10:36:01
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lantianjesus

新虫 (小有名气)
1.标曲怎么做才能线性拟合度高呢？
2.今天重做BSA发现紫外特征峰偏移到了220，峰图完全和以前测的不一样，莫非BSA一夜之间到期变性了，郁闷死我了！！！
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7楼2013-10-11 10:55:49
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qianye325326

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
异氰酸酯: 金币+1, 感谢交流 2013-12-09 10:39:48
最好采用缓冲溶液，这样可以最大限度的避免蛋白变性，吸附后吸光度增加可能是由于吸附材料上杂质溶出或者蛋白变性造成的。
比色时应该使用石英比色皿。
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2楼2013-10-08 17:43:31
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lantianjesus

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qianye325326 at 2013-10-08 17:43:31
最好采用缓冲溶液，这样可以最大限度的避免蛋白变性，吸附后吸光度增加可能是由于吸附材料上杂质溶出或者蛋白变性造成的。
比色时应该使用石英比色皿。

缓冲液有很多种，会不会对我合成的吸附材料吸附能力有影响？我看的有报道上面吸附都用水，而脱附则采用缓冲液，缓冲液一般都用磷酸类缓冲液吗？还是说根据PH范围来选择配置？
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3楼2013-10-09 10:44:15
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qlw4567

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
异氰酸酯: 金币+1, 感谢交流 2013-12-09 10:40:24
蛋白质一般都非常脆弱，容易变性，在变性过程中，蛋白质外面所含的生色基团有所不同，甚至能超过你吸附后的量，所以做蛋白质实验最基本的要求是对其达到稳定。缓冲溶液是最好也是常用的稳定蛋白质体系，一般有磷酸类、TRIS-盐酸类等。pH值有6.8、7.0、7.2，甚至更大或更小，关键是看你的要求和在你要求范围内，蛋白质是否稳定。还有做蛋白质标准曲线的时候，稀释法的确是能导致你所做的情况。
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努力和媳妇一起上完博士
4楼2013-10-10 08:12:50
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