应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » HIS-Bcl2
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
31/1返回列表
查看: 277  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ferments

新虫 (初入文坛)

[交流] HIS-Bcl2 已有1人参与

请问各位大神有没有纯化HIS-Bcl2蛋白的？要用多少mM的浓度的咪唑才能把Bcl2蛋白洗下来啊 ？？？最近做binding分析，头大啊 急急急急！！！ 谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-09-26 20:09:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyh1983

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 20:39:44
对于带有6His tag重组蛋白的纯化，首先可以用含有20mM、40mM、60mM咪唑的缓冲液漂洗以去除杂蛋白（此3个梯度并非固定，可适当调整），最后的洗脱可用250mM-500mM咪唑的Elution Buffer洗脱，据我个人经验，一般用250或300mM咪唑就能几乎完全洗脱目的蛋白。祝顺！
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-28 10:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ferments

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shyh1983 at 2013-09-28 10:54:56
对于带有6His tag重组蛋白的纯化，首先可以用含有20mM、40mM、60mM咪唑的缓冲液漂洗以去除杂蛋白（此3个梯度并非固定，可适当调整），最后的洗脱可用250mM-500mM咪唑的Elution Buffer洗脱，据我个人经验，一般用250 ...

谢谢你的回复，我的实验目的是做个PULL-DOWN  就是要把his非特异性结合的蛋白去除

具体如下：A蛋白和B蛋白，其中B蛋白带有HIS tag ，A蛋白没有，B 蛋白有可能和A蛋白发生相互作用，这样的话用NI-NTA beads结合的话，B蛋白就会结合到beads上去，A蛋白也就被B蛋白拉住了。有缓冲液西区未结合的A,B蛋白就可以跑胶验证了。  一个问题是我们发现不带his的A蛋白也能和NI-NTA结合，所以要用咪唑洗去这种非特异性结合，可是我们目前还没有找到一个合适的浓度可以洗去这种非特异性结合，而又不能把特异性结合洗下来。 所以请教大虾你多多指教。
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-29 08:58:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ferments 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +3 kikiki7 2026-03-30 3/150 2026-03-30 06:10 by 王保杰33
[考研] 343求调剂085601 +3 要努力学习x 2026-03-29 3/150 2026-03-29 18:35 by wxiongid
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 311求调剂 +3 希望上岸阿小杨 2026-03-23 3/150 2026-03-28 07:57 by 热情沙漠
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭