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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 为什么我提取的DNA样品经常PCR但是没条带没结果呢？愁啊愁啊
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晴梦惬cool

木虫 (小有名气)

[求助] 为什么我提取的DNA样品经常PCR但是没条带没结果呢？愁啊愁啊

针对我提取的DNA样品进行PCR扩增，始终是有时能P出来，但是很多时候都是P不出来，条带上什么都没有。之前每次PCR都会将样品稀释然后统一一个浓度，然后加入PCR体系中，老师对我的实验细节进行纠正后，让我这次PCR不用稀释了，直接加1ul到25ul的体系中，来看一下整体到底有多少样品剩余下来可以P出来的，可是以前稀释过的也才加0.8ul而已，所以内心疑虑，样品浓度加得有点大，会不会即使能P出来的也变得P不出来了呢？？？？
同时我又愁，都做了有一段时间了，为什么我的PCR结果还是这么不稳定呢，一会能P出来一会P不出来，导致一直也做不出个所以然来………………
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1楼 2013-09-23 21:15:09
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴梦惬cool at 2013-09-25 08:21:22
我和我师姐都是DNA样品，而且都是相同的PCR程序，可是她的PCR都OK，我的却老是P不出来，纠结了好久...

肯定是搞不定师姐才来这里求助的，

做PCR实验P不出来的原因，有无数条，根本没法具体到那一条。

你在这里描述，别人还是不清楚你们实验室的情况。

所以，搞定师姐最重要
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环境卫生、微生物学、卫生应急
5楼2013-09-26 14:38:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-09-24 09:38:08
晴梦惬cool: 金币+15 2013-09-26 08:42:54
模板浓度高当然会影响PCR效果，可能会P不出来。高浓度模板可能造成退火时模板自身配对儿影响与引物的配对。
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2楼2013-09-23 22:16:39
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晴梦惬cool

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-23 22:16:39
模板浓度高当然会影响PCR效果，可能会P不出来。高浓度模板可能造成退火时模板自身配对儿影响与引物的配对。

我和我师姐都是DNA样品，而且都是相同的PCR程序，可是她的PCR都OK，我的却老是P不出来，纠结了好久
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3楼2013-09-25 08:21:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴梦惬cool at 2013-09-25 08:21:22
我和我师姐都是DNA样品，而且都是相同的PCR程序，可是她的PCR都OK，我的却老是P不出来，纠结了好久...

PCR出问题一般是模板。如果引物没有问题的话，一般是模板浓度或者质量的不好。你可以试试用你的模板P一下其他基因，看看是不是模板的问题。
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4楼2013-09-26 03:04:50
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