24小时热门版块排行榜    

查看: 1351  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

晴梦惬cool

木虫 (小有名气)

[求助] 为什么我提取的DNA样品经常PCR但是没条带没结果呢?愁啊愁啊

针对我提取的DNA样品进行PCR扩增,始终是有时能P出来,但是很多时候都是P不出来,条带上什么都没有。之前每次PCR都会将样品稀释然后统一一个浓度,然后加入PCR体系中,老师对我的实验细节进行纠正后,让我这次PCR不用稀释了,直接加1ul到25ul的体系中,来看一下整体到底有多少样品剩余下来可以P出来的,可是以前稀释过的也才加0.8ul而已,所以内心疑虑,样品浓度加得有点大,会不会即使能P出来的也变得P不出来了呢????
同时我又愁,都做了有一段时间了,为什么我的PCR结果还是这么不稳定呢,一会能P出来一会P不出来,导致一直也做不出个所以然来………………
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴梦惬cool at 2013-09-25 08:21:22
我和我师姐都是DNA样品,而且都是相同的PCR程序,可是她的PCR都OK,我的却老是P不出来,纠结了好久...

肯定是搞不定师姐才来这里求助的,

做PCR实验P不出来的原因,有无数条,根本没法具体到那一条。

你在这里描述,别人还是不清楚你们实验室的情况。

所以,搞定师姐最重要
环境卫生、微生物学、卫生应急
5楼2013-09-26 14:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-09-24 09:38:08
晴梦惬cool: 金币+15 2013-09-26 08:42:54
模板浓度高当然会影响PCR效果,可能会P不出来。高浓度模板可能造成退火时模板自身配对儿影响与引物的配对。
2楼2013-09-23 22:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晴梦惬cool

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-23 22:16:39
模板浓度高当然会影响PCR效果,可能会P不出来。高浓度模板可能造成退火时模板自身配对儿影响与引物的配对。

我和我师姐都是DNA样品,而且都是相同的PCR程序,可是她的PCR都OK,我的却老是P不出来,纠结了好久
3楼2013-09-25 08:21:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴梦惬cool at 2013-09-25 08:21:22
我和我师姐都是DNA样品,而且都是相同的PCR程序,可是她的PCR都OK,我的却老是P不出来,纠结了好久...

PCR出问题一般是模板。如果引物没有问题的话,一般是模板浓度或者质量的不好。你可以试试用你的模板P一下其他基因,看看是不是模板的问题。
4楼2013-09-26 03:04:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 6/300 2026-08-25 00:11 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见