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晴梦惬cool

木虫 (小有名气)

[求助] 为什么我提取的DNA样品经常PCR但是没条带没结果呢?愁啊愁啊

针对我提取的DNA样品进行PCR扩增,始终是有时能P出来,但是很多时候都是P不出来,条带上什么都没有。之前每次PCR都会将样品稀释然后统一一个浓度,然后加入PCR体系中,老师对我的实验细节进行纠正后,让我这次PCR不用稀释了,直接加1ul到25ul的体系中,来看一下整体到底有多少样品剩余下来可以P出来的,可是以前稀释过的也才加0.8ul而已,所以内心疑虑,样品浓度加得有点大,会不会即使能P出来的也变得P不出来了呢????
同时我又愁,都做了有一段时间了,为什么我的PCR结果还是这么不稳定呢,一会能P出来一会P不出来,导致一直也做不出个所以然来………………
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晴梦惬cool

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-23 22:16:39
模板浓度高当然会影响PCR效果,可能会P不出来。高浓度模板可能造成退火时模板自身配对儿影响与引物的配对。

我和我师姐都是DNA样品,而且都是相同的PCR程序,可是她的PCR都OK,我的却老是P不出来,纠结了好久
3楼2013-09-25 08:21:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-09-24 09:38:08
晴梦惬cool: 金币+15 2013-09-26 08:42:54
模板浓度高当然会影响PCR效果,可能会P不出来。高浓度模板可能造成退火时模板自身配对儿影响与引物的配对。
2楼2013-09-23 22:16:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴梦惬cool at 2013-09-25 08:21:22
我和我师姐都是DNA样品,而且都是相同的PCR程序,可是她的PCR都OK,我的却老是P不出来,纠结了好久...

PCR出问题一般是模板。如果引物没有问题的话,一般是模板浓度或者质量的不好。你可以试试用你的模板P一下其他基因,看看是不是模板的问题。
4楼2013-09-26 03:04:50
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴梦惬cool at 2013-09-25 08:21:22
我和我师姐都是DNA样品,而且都是相同的PCR程序,可是她的PCR都OK,我的却老是P不出来,纠结了好久...

肯定是搞不定师姐才来这里求助的,

做PCR实验P不出来的原因,有无数条,根本没法具体到那一条。

你在这里描述,别人还是不清楚你们实验室的情况。

所以,搞定师姐最重要
环境卫生、微生物学、卫生应急
5楼2013-09-26 14:38:40
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