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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 其他 » 求助酶分离时透析缓冲液的配置？急急急！！！
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mepeng87

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助酶分离时透析缓冲液的配置？急急急！！！

粗酶液经硫酸铵沉淀后，想借助透析除盐，之前用了超纯水和PH为8的PBS作为透析液都使酶的活性降低很多。求助怎么办呢？
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1楼2013-09-23 13:27:33
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
透析除盐时的条件相对酶来说有点恶劣，是不是因为透析时间过长温度过高导致酶失活
另外，你需要根据酶来选择透析袋，要不然可能连酶一起出去了
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走的太远，别忘了为何出发
2楼2013-09-23 14:52:27
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mepeng87

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zybpxy at 2013-09-23 14:52:27
透析除盐时的条件相对酶来说有点恶劣，是不是因为透析时间过长温度过高导致酶失活
另外，你需要根据酶来选择透析袋，要不然可能连酶一起出去了

时间是过夜，温度我刻意控制了一下，最高20度左右，不至于使酶失活，透析袋是五千的也不高，感觉是不是缓冲液的问题，这个是碱性酶，活性在PH为11最高，但透析液的PH总不能也调到11吧，所以很愁人，您有什么建议没有？
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3楼2013-09-23 20:14:21
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想去看海

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zybpxy: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-24 17:45:11
透析要在4℃条件下进行，缓冲液只要不是极高或极低的PH都没有太大问题，一般7-8之间。透析难免会有一些酶活力损失，如果对酶活有精细要求的话可以分几个pH梯度透析
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4楼2013-09-23 23:47:15
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calledone

至尊木虫 (职业作家)

小小木虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为您没有提及所透析带酶具体是哪种以及原料，建议你再查看下文献，详细了解下有无以下可能：
（1）该酶是带有辅基的结合酶，透析时金属离子逃出，导致活力丧失。这种情况下可以适当补充该类金属离子以保障活力。
（2）粗酶液中是否存在蛋白酶？如果有蛋白酶的话，可能会降解目标酶，导致活力不可逆丧失或降低。
祝顺利。
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日行一善，善行一生。
5楼2013-09-25 00:04:33
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