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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】圆二色信号强度太低
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惊鸿孤梦

铁杆木虫 (小有名气)

菁菁

[求助] 【求助】圆二色信号强度太低

最近在做人胰岛淀粉样多肽的圆二色，但是无论怎么做信号强度都很小。把多肽浓度从16μM提高到了32μM，皿的路径长度也从0.2mm换到了1mm，狭缝从2nm改成了5nm，可是信号强度几乎就没怎么增大，也就零点几的样子。这是怎么回事呢？是我的样品有问题？还是仪器有问题？PS：我的样品里有1-2%的六氟异丙醇，但是文献里也有这么做的，不知道会不会有这么大影响。还有我们的圆二色换过一次灯，之后信号抖动就比较厉害了，不知道是不是仪器的原因。。。
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1楼 2013-09-22 17:35:22
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e2zhanbo

铜虫 (初入文坛)
在哪里做的，什么仪器型号？
有测过紫外吗？
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2楼2013-09-30 12:48:21
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惊鸿孤梦

铁杆木虫 (小有名气)

菁菁
引用回帖:
2楼: Originally posted by e2zhanbo at 2013-09-30 12:48:21
在哪里做的，什么仪器型号？
有测过紫外吗？

仪器是Jasco公司的J-810，只测过一次紫外，在210nm的吸收比较大，其它波长下吸收都不大。。。
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3楼2013-11-04 17:53:34
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
惊鸿孤梦: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2013-11-16 16:03:13
1.LZ可以测个常用蛋白BSA之类的看信号如何，如果正常，就是样品的问题。不正常就是机器的问题。
2.园二可以测紫外，将紫外图谱和园二谱一比较就知道了。紫外和园二都低，则样品太少或机器出问题了（淀粉样蛋白溶解性不好可能有影响。紫外正常园二低，样品呈对称状无各向异性，样品的问题
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4楼2013-11-05 10:50:08
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惊鸿孤梦

铁杆木虫 (小有名气)

菁菁
引用回帖:
4楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-11-05 10:50:08
1.LZ可以测个常用蛋白BSA之类的看信号如何，如果正常，就是样品的问题。不正常就是机器的问题。
2.园二可以测紫外，将紫外图谱和园二谱一比较就知道了。紫外和园二都低，则样品太少或机器出问题了（淀粉样蛋白溶解 ...

好的，回头我试试，谢谢啦~还有请问信号波动很严重是仪器的问题呢还是样品的问题？如何能克服呢？
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5楼2013-11-06 10:13:33
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hl16010921

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 惊鸿孤梦 at 2013-11-06 10:13:33
好的，回头我试试，谢谢啦~还有请问信号波动很严重是仪器的问题呢还是样品的问题？如何能克服呢？...

一般信号波动大，主要是两个原因1.样品溶解不好，有悬浮的小颗粒，出现了散射现象，导致光路不均一。2.光源（一般是氘灯）使用超过一定年限，能量不足，发光不稳定。另外的次要原因有：1光路上有的镜片太脏。2。预热不充分3.测定的物质稳定性差。4.环境温度不恒定。我估计主要是淀粉样蛋白出现了聚集引起了散射。
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6楼2013-11-06 12:48:40
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惊鸿孤梦

铁杆木虫 (小有名气)

菁菁
引用回帖:
6楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-11-06 12:48:40
一般信号波动大，主要是两个原因1.样品溶解不好，有悬浮的小颗粒，出现了散射现象，导致光路不均一。2.光源（一般是氘灯）使用超过一定年限，能量不足，发光不稳定。另外的次要原因有：1光路上有的镜片太脏。2。预 ...

那应该怎么解决呢？是要在做之前离心吗？
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7楼2013-11-16 16:01:11
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hl16010921

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 惊鸿孤梦 at 2013-11-16 16:01:11
那应该怎么解决呢？是要在做之前离心吗？...

1.离心试试，看有无改善。2.由于淀粉样蛋白的聚集形态影响其性质，这可能是LZ关心的，所以上清的圆二不一定反应了真实的构象，只能反应可溶部分的构象。3.没做过不溶样品的圆二，不知该如何处理，LZ试试ACS数据库中该蛋白圆二的方法，如果有人用助溶溶剂的话，LZ可以试试
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8楼2013-11-16 20:28:02
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惊鸿孤梦

铁杆木虫 (小有名气)

菁菁
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8楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-11-16 20:28:02
1.离心试试，看有无改善。2.由于淀粉样蛋白的聚集形态影响其性质，这可能是LZ关心的，所以上清的圆二不一定反应了真实的构象，只能反应可溶部分的构象。3.没做过不溶样品的圆二，不知该如何处理，LZ试试ACS数据库中 ...

非常感谢~
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9楼2013-11-18 22:27:58
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