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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助解读PCR图为什么会这么烂

之前做的都挺不错挺稳定的 回了半个月的家  之后就做不出来了 所有的东西都换新的试了还是不行啊  ,,,,求大侠指点迷津   
体系25ul
buffer  2.5    Dntp  2    F  0.3   R  0.3   模板 0.5 酶  0.5  水补至25ul
求助解读PCR图为什么会这么烂
求指点迷津
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
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iayala

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你好!帮你想的对策:
1. check your pirmers。不过通常应该没有问题。可以到primer-BLAST去试试
2. 做模板梯度:稀释100倍,10倍,还有增加1倍,2倍,5倍,10倍,20倍。
3. 必要时跑胶check 模板是否降解。
4. 降低TM值,如果以上都不出,可以试试增加TM或者跑梯度。
没有理由不出带的。
14楼2013-09-23 11:02:53
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-18 10:22:24
我感觉你的引物有问题,确定是新的?还有就是你的DNA质量不确定。

[ 发自小木虫客户端 ]
学习使你立于不败之地
2楼2013-09-18 00:58:19
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物不好,基本没P出来,都是弥散的
3楼2013-09-18 08:57:12
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-09-18 10:22:34
个人觉得模板不行,同时退火温度可能有点高!Good luck!
互助互励,共奋共进!!
4楼2013-09-18 09:34:46
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