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monkeyguoguo

新虫 (初入文坛)

[求助] 跑内参actin 和目的基因老是拖带， 是怎么回事

目的基因
跑内参actin 和目的基因老是拖带， 是怎么回事

内参
跑内参actin 和目的基因老是拖带， 是怎么回事-1

提了好多次RNA，检测效果还是可以（提RNA的时候组织样品加得多，加了trizol连天trizol的颜色都变成橙色了，会有影响吗）跑内参actin 和目的基因老是拖带， 是怎么回事-2[/img]

但是反转录后跑内参和目的， 内参不是拖带就是跑的不亮。   目的就更是一塌糊涂。 操作都是按照要求来的。 试剂也没问题。  大虾们麻烦帮我看看，会不会是 提rna 的时候蛋白污染还是怎么了？            

[ Last edited by monkeyguoguo on 2013-9-17 at 10:57 ]
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1楼 2013-09-17 10:55:21
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yaoshouxiu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

拖带现象是刚做PCR时经常遇到的问题，导致这个现象的原因很多比如酶量过多，RNA降解，温度不合适等，有时候与试剂有关，你要慢慢找原因 先通过RNA电泳检测一下提取的RNA是不是达标，然后是PCR过程，可以让做的好的同学用你的试剂做一下，慢慢找 没有人能一眼就看出你问题的关键
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2楼2013-09-17 12:43:48
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polixingjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
monkeyguoguo: 金币+1, 博学EPI+1, ★有帮助 2013-09-20 22:20:40
电压先用15-20V跑一跑，十五到二十分钟后再加大电压。
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加油~
3楼2013-09-17 16:53:59
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monkeyguoguo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yaoshouxiu at 2013-09-17 12:43:48
拖带现象是刚做PCR时经常遇到的问题，导致这个现象的原因很多比如酶量过多，RNA降解，温度不合适等，有时候与试剂有关，你要慢慢找原因 先通过RNA电泳检测一下提取的RNA是不是达标，然后是PCR过程，可以让做的好的同 ...

引物和试剂都换过，TM值也换过几次，但跑出来都效果不太好。 想请问大虾，会不会是反转录的时候DNA ERASER加入后反应时间不够照成的DNA 污染呢？
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4楼2013-09-18 10:51:20
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