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shenhaiwang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
冰凝草: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-03 13:16:36

引用回帖:

4楼: Originally posted by 冰凝草 at 2013-09-19 17:06:16
你好，能具体说下分子量大小和等电点以及那个硫酸铵分级的选择么，还有如果我想保持那个蛋白的活性，是不是用高盐浓度不大好呢。谢谢...

分子量大小，可以通过查阅以前报道的相关文献获得，或者在NCBI数据库中查到其氨基酸序列，进行换算；等电点也可以通过NCBI数据库中根据目的蛋白氨基酸序列的预测获得，但是不是很准确，准确的方法是利用等点聚焦或者双向电泳分析。硫酸铵沉淀的话，你可以先从20%开始，每隔10个饱和度，来分级进行沉淀，将所得沉淀重新溶解，进行SDS-PAGE分析，观察目的蛋白在那个范围内沉淀量比较多、杂蛋白较少，来确定最佳的硫酸铵饱和度。一般情况下，硫酸铵不会影响蛋白的活性，很多酶的纯化都可以用这个方法。你可以先试试硫酸铵沉淀，如果确实会导致蛋白变性的话，在采取其他措施吧

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11楼2013-09-25 11:34:34

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