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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 凋亡蛋白相关蛋白Bax与Bcl2的western检测,高手做过的请讲解一下!!!!! 已有1人参与

本人最近要做两个与凋亡相关的蛋白Bax与Bcl2,主要的做法是用RIPA裂解液裂解细胞,取上清做western。请教一下,做过相关实验的高手,这两种蛋白是不是容易检测??? 检测的经验能够谈一下吗????谢谢了!!
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

大家进来讨论一下啊!!!
2楼2013-09-16 00:08:47
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

很容易检测,是常见的。
3楼2013-09-16 10:44:58
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by a83875785 at 2013-09-16 10:44:58
很容易检测,是常见的。

谢谢你啊,我想问一下你以前检测过这两种蛋白吗?使用的具体条件是什么样???比如转膜的条件?
4楼2013-09-16 10:54:09
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by czcpudai at 2013-09-16 11:54:09
谢谢你啊,我想问一下你以前检测过这两种蛋白吗?使用的具体条件是什么样???比如转膜的条件?...

时间太长,忘记了,我是湿转,转膜是1h~1h30min之间吧,看看蛋白大小就知道了 一般在这范围内 都能转过去
5楼2013-09-16 11:28:33
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by a83875785 at 2013-09-16 11:28:33
时间太长,忘记了,我是湿转,转膜是1h~1h30min之间吧,看看蛋白大小就知道了 一般在这范围内 都能转过去...

非常感谢啊!
6楼2013-09-16 11:54:24
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ahumcg

新虫 (初入文坛)

请问检测时凋亡时期有讲究吗?比如晚期能检测到吗,另外上样量是要多大,如果是一个六孔板的细胞能够吗
7楼2013-10-17 22:20:28
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药理小虫子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-07-21 08:13:17
我最近正在做,还是比较好做出来的~我是湿法转的,55Min,100V。我用的六孔板,3000的蛋白浓度,上样15ul吧
8楼2014-07-21 07:50:12
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