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baggio00009铜虫 (小有名气)
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[求助]
天然产物生物合成途径方向求助
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| 我现在在做一种化合物的生物合成途径，这条途径并不是经典的那几个途径，属于PKS范畴，是我们预测的一条途径，所以做起来有很大风险。现在有个问题我怎么也想不通，就是我在这个植物叶子里面能检测到目标化合物，而且含量很高，然后我使用文献中的一些通用方法提取叶子粗蛋白，然后做体外酶触反应，但是并没有相应产物出现，虽然我知道这个有可能发生，但是我希望找到问题在哪，我试了几种不同的提蛋白方法，也试了不同PH的buffer，经过SDS胶能确定提出了蛋白，可就是没有相应的活性，希望有熟悉这方面的朋友帮我分析一下原因，万分感谢。 |
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hl16010921
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-12 18:12:11
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| 1.由于这步反应是你推测的，你无从知道生物中该反应的底物是否是你加入的底物。有该产物，但原料不一定是你推测的。2.酶活力太低。如果该酶含量少而且比较容易失活的话可能酶活力损失较大。3，该酶不在粗蛋白中，而混在其他成分里。通用提蛋白的方法只针对大多数蛋白，而对某些特定蛋白不适用。如果嵌到纤维素或木质素中你怎么也提不到。4.酶活测定方法不对。温度，pH，离子强度，特别是辅基或辅因子都对酶活影响很大。同样pH值缓冲体系不同结果完全不同。 |
2楼2013-09-11 12:44:05