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[求助]
求助指点MDA的检测
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我做的是大鼠肝脏缺血再灌注模型，用药物治疗后比较空白组，模型组和治疗组三组之间的差异。其中肝脏组织中MDA的含量是一项指标，可是我已经做了7次MDA检测，并多番咨询同学老师以及试剂商仍然未能作出有趋势的结果，所以到这里来问问路过的大神。 我的肝脏组织是在模型与干预都结束后将大鼠麻醉，开腹，从肝脏中叶剪下肝脏组织，称重保留0.1g组织并迅速放入冻存管，在液氮中保存。组织匀浆时将组织从冻存管中取出放入匀浆管，再加入碧云天Western及IP细胞裂解液1ml，三颗匀浆的磁珠，用匀浆机匀浆30秒中后再次放入碎冰中降温1min，然后再次匀浆30秒，降温1min，直到组织匀浆满意为止（最多三个循环即可），之后用10000rpm离心取上清得匀浆液。获得的匀浆液用碧云天MDA试剂盒检测其中的MDA含量。检测结果中，标曲的R2（相关系数）达到0.9998，可是空白组，模型组和治疗组没有出现什么趋势，三组基本持平，连续做了几次都是这样，我又将匀浆液稀释了一倍仍然没结果（有人说是蛋白浓度太高可能影响监测结果）。特在此求助，如果有童鞋成功帮我解决问题我会再追加一倍的奖励，谢谢~！ |
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