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2013-09-05 18:39:51, 1.71 M
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 蛋白质生物学实验经验 |
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4楼2013-09-06 10:28:16
凌波丽
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【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-06 08:24:40
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横纹众多，应该是聚焦不完全。 原因与对策： 1.样品没有完全溶解，上样前确保样品完全溶解并且保持稳定。 2.样品中存在干扰IEF的物质存在，改进样品制备方法，可用分子筛、超滤、透析等纯化蛋白质样品。 3.样品中存在存在干扰IEF的离子。可用超滤、透析等纯化蛋白质样品降低离子强度（离子浓度要小于10mmol/L)；或者用TCA、丙酮沉淀蛋白质，然后用缓冲溶液重新溶解被沉淀的蛋白质（当然弃去TCA、丙酮）。 4.做等电聚焦时离子型去垢剂太多时也会出现横纹，将样品用超滤、透析去掉离子型去垢剂，改用离子型去垢剂替代之。 5.上样量过大。需要适当减少上样量。 6.聚焦时间过短使得聚焦不完全。需要适当延长聚焦时间。 7.聚焦时间过长，引起胶内渗水，并且改变了凝胶的内部的电场微环境，使得蛋白质样品再次发生移动，导致横纹。电泳时间不能过长。 8.楼主实验用的水是不是也有问题。应该用超纯水。 |
2楼2013-09-06 00:20:58
凌波丽
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2013-09-06 00:25:21, 1.71 M
3楼2013-09-06 00:23:44
