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usstcyq

新虫 (初入文坛)

[求助] 液相走葡萄糖、果糖、蔗糖三个标准品出峰一模一样,保留时间也很短,求解救! 已有3人参与

本人液相新人,最近在用安捷伦1200做一个果汁样品里的三种糖和三种有机酸(酒石酸、苹果酸、柠檬酸)先说糖的问题,柱子是氨基柱zorbax NH2,250*4.6mm,rid检测器,流动相是乙腈:水=7:3和7.5:2.5都试过了,流速1ml/min,分别进三种标准品(单标),但是跑出来保留时间都只有3min左右,而且三种糖的单标出峰时间和峰形居然都差不多,这柱子和标准品本身肯定都没有问题,我的标准品配的是0.1mg/ml的浓度,就是蒸馏水配的,混标我也进了,分不开,就还是在三分钟的时候出一个峰,后面就没有了(我走到20min才停的)
还有有机酸也有问题,我用C18柱做的,流动相是98%磷酸氢二铵(ph=3左右)+2%甲醇,我先进标准品,三种标准品保留时间都只有一两分钟,峰也长的差不多,我快崩溃了,求大神解救。。。
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cxy8023

银虫 (初入文坛)

路漫漫其修远兮吾将上下而求索
6楼2015-11-27 17:21:41
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mao398019986

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是做糖的,要分离蔗糖葡萄糖果糖,我用的是KS801,专门的糖柱分离柱。其他的我不太懂,你可以换换柱子。我新买的柱子,刚开始用,混合3糖进样,分离的还不错。
2楼2015-11-24 22:10:19
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w9412

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

C18柱子可以用来检测糖?
液相,分析纯化,多肽蛋白
3楼2015-11-25 13:13:16
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xuyingemail

新虫 (小有名气)

糖的问题:色谱柱不合适,考虑换用糖柱。
酸的问题:酸极性大,在C18柱上保留太弱。建议换用T3柱或别的色谱柱,缓冲盐的pH值需要根据三种酸的pKa值调整,及pH<pKa-2或pH>pKa+2,同时注意不要超过了色谱柱耐受的pH范围。
4楼2015-11-25 17:29:20
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