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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA反转录
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1989zb

金虫 (小有名气)

[交流] RNA反转录 已有6人参与

提取的RNA如果有酒精残留会不会对反转录造成严重的影响??  会影响后面cDNA的合成吗 ？？？？
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1楼 2013-09-04 19:44:49
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随波逐刘

新虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-04 20:54:49
如果很多的话，会影响酶活性吧，特别是如果有盐离子的时候，醇沉淀之后尽量去除乙醇，干燥后溶解。。。我室温下干燥5min左右差不多了。。。
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2楼2013-09-04 19:55:21
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 随波逐刘 at 2013-09-04 19:55:21
如果很多的话，会影响酶活性吧，特别是如果有盐离子的时候，醇沉淀之后尽量去除乙醇，干燥后溶解。。。我室温下干燥5min左右差不多了。。。

哦 症状很相似的病料,就是不知道怎么提取的RNA 总是p不出来
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3楼2013-09-04 21:09:35
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-05 14:33:59
酒精一定要吹干蒸发干净，酒精会使核酸沉淀不溶，影响下一步的试验
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自主创业者，捣腾生物试剂
4楼2013-09-05 09:44:09
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喔喔0208

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-09-05 09:44:09
酒精一定要吹干蒸发干净，酒精会使核酸沉淀不溶，影响下一步的试验

您好，我刚开始做这方面，麻烦问一下，原核的16S rRNA和它的16S rDNA是什么样的关系，我要用肺炎链球菌的16S rRNA做菌种鉴定，一定需要做RNA的反转录才能做PCR吗，还有如果要做反转录麻烦提供一下都需要什么试剂，我要开始课题了，需要定试剂，谢谢您了
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5楼2013-09-05 11:10:01
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-05 14:34:14
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-28 22:38:06
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5楼: Originally posted by 喔喔0208 at 2013-09-05 11:10:01
您好，我刚开始做这方面，麻烦问一下，原核的16S rRNA和它的16S rDNA是什么样的关系，我要用肺炎链球菌的16S rRNA做菌种鉴定，一定需要做RNA的反转录才能做PCR吗，还有如果要做反转录麻烦提供一下都需要什么试剂， ...

RNA结构不稳定，极易污染降解，在PCR过程中，高温会使RNA降解，需要反转成cDNA稳定的结构，用于进一步的试验，反转过程买个试剂盒就好的，按说明书做就好
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自主创业者，捣腾生物试剂
6楼2013-09-05 11:24:46
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喔喔0208

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-09-05 11:24:46
RNA结构不稳定，极易污染降解，在PCR过程中，高温会使RNA降解，需要反转成cDNA稳定的结构，用于进一步的试验，反转过程买个试剂盒就好的，按说明书做就好...

首先谢谢你的回复~那就是先提取出RNA，然后进行反转，用cDNA做下一步的PCR?
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7楼2013-09-05 14:08:42
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charrymiao

新虫 (初入文坛)
肯定会的
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慎独
8楼2013-09-07 20:26:02
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feilinshiji

银虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 喔喔0208 at 2013-09-05 11:10:01
您好，我刚开始做这方面，麻烦问一下，原核的16S rRNA和它的16S rDNA是什么样的关系，我要用肺炎链球菌的16S rRNA做菌种鉴定，一定需要做RNA的反转录才能做PCR吗，还有如果要做反转录麻烦提供一下都需要什么试剂， ...

16S rRNA是16S rDNA的转录产物，因为16S rDNA在不同菌种间具有高度的保守性，所以可以用这个来鉴定菌种。有两种方案可供选择，一是提取RNA反转录成cDNA做PCR，二是直接提取细菌基因组做PCR。
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喔喔0208
9楼2013-09-27 17:30:46
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喔喔0208

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by feilinshiji at 2013-09-27 17:30:46
16S rRNA是16S rDNA的转录产物，因为16S rDNA在不同菌种间具有高度的保守性，所以可以用这个来鉴定菌种。有两种方案可供选择，一是提取RNA反转录成cDNA做PCR，二是直接提取细菌基因组做PCR。...

谢咯，导师又改变方向了，换了个课题，有的人说能做出来，有的人说做不出来，惆怅
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10楼2013-09-27 20:00:08
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