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qsx04152006木虫 (知名作家)
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SOE-PCR
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本人准备将两端基因连接在一起，一段长1620bp，，另一端长106bp，不知道用SOE-PCR能否将他们连接在一起。 1、107bp做pcr容易扩吗，产生引物二聚体的话怎么回收？ 2、我的引物设计是否合适？重叠部分为20bp 基因1的序列：ATGGGGACAGTTAATAAACCTGTG.......CACTTCTACGATATGCCGCA 上游引物A：ATGGGGACAGTTAATAAACCTGTG（24bp） 下游引物B: GAATAAATTGACAATATTTG+TGCGGCATATCGTAGAAGTG 基因2的序列,106+TAA：CAAATATTGTCAATTTATTCTACAGTGGCGAGCTCCCTAGCACTGGCAATCATGGTAGCTGGTCTATCCTTATGGATGTGCTCCAATGGGTCGTTACAATGCAGAA+TAA（共109bp） 上游引物C：CACTTCTACGATATGCCGCA（20bp，基因1的3”端20bp序列）+ CAAATATTGTCAATTTATTC（基因2的5“端20bp） 下游引物D：TTATTCTGCATTGTAACGACCCATTG（26bp），其中用引物A和B扩增基因1，用引物C和D扩增基因2，然后用各自的PCR产物做模板，不加引物空延伸7个循环，再用引物A和D为引物，以上步空延伸的产物做模板，进行PCR扩增，这样是否可行？请大家指点，谢谢！ |
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