应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » phosphate Bad western 检测的条件
51/1返回列表
查看: 901  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qiannv04

新虫 (初入文坛)

[求助] phosphate Bad western 检测的条件

如题啊，由于Bad蛋白比较小，只有23KDa，磷酸化形式的更是很难检测，我用的转膜条件为定流，350mA，30min，酪蛋白封闭2h,一抗4℃过夜。但还是不行，求助高手指点啊，多谢啦~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-09-02 23:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-03 13:13:12
不知道这蛋白,但是有一点问题: 你的抗体是测磷酸化的吗?
如果是的话,最好别用酪蛋白做封闭,用BSA做封闭,因为酪蛋白含有大量磷酸化形式的蛋白,背景很高
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2013-09-03 01:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiannv04

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-09-03 01:03:37
不知道这蛋白,但是有一点问题: 你的抗体是测磷酸化的吗?
如果是的话,最好别用酪蛋白做封闭,用BSA做封闭,因为酪蛋白含有大量磷酸化形式的蛋白,背景很高

谢谢你的建议，也有人建议我不要用酪蛋白封闭。但是我发其他磷酸化的蛋白也用酪蛋白封闭，没有问题，所以应该不单是封闭液的问题。
我的最主要的困境是根本发不出条带。。。
Bad是Bcl2家族中抗凋亡类别中的一员。
再次谢谢你的解答。
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-03 23:39:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你验证转膜是否问题了吗？，如没有验证，可以用丽春红预染看看是否转膜成功。
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-04 07:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiannv04

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 514278815 at 2013-09-04 07:57:38
你验证转膜是否问题了吗？，如没有验证，可以用丽春红预染看看是否转膜成功。

转膜没有问题的，因为我同时还检测了其他的分子，可以正常的发出条带。还可能是什么原因呢？您在发这种小分子量而且可能低丰度的蛋白时的条件是什么样子的呢？
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-04 21:25:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qiannv04 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭