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[求助]
平板保存的菌再划线长不出来了
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大家好。我使用5月份4℃保存的黄杆菌平板（用来做PAH的生物降解），没长出来。就用液体培养基试了下。具体操作步骤是： 1、将装有液体培养基（封口）的三角瓶直接放在无菌操作台上，开紫外灭菌30分钟。（以前师姐都是放入灭菌锅，我嫌耗时长，就偷了个懒，按理说紫外也可以杀菌哈。） 2、然后将5月份的平板菌，挑了一环到液体里。放在水浴振荡器里培养。 第3天培养液透明度降低，呈现黄色。我想着应该是长出来了。但是担心活性不够。就重复上述步骤。将培养液里的菌液重新接入新的培养液里继续振荡培养。但是今天是第3天，我发现新的三个转接瓶里，一个变成深绿色了（怀疑染菌！），其他两个的液面均出现白色的泡沫。求助： 1、这是否是染菌现象？ 2、因为黄杆菌出现过平板传代不长菌，这说明菌已失活，我再用它在液体里长出来了。需要重复的用液体转接吗？还是说只要长出来了，就可以再接入平板？ 3、我的操作步骤是否有问题？ 因微生物知识欠缺，还请大家指点，感激不尽！ |
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国自然评审意见
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我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？
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dehong1573
至尊木虫 (正式写手)
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- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
，还有，直接上那么上那么大体积培养基，放了几个月的菌那还能长啊；得先小体积活化后在扩大呀，总的来说，问题很大，欠缺微生物基本知识 
11楼2013-09-01 22:29:02
2楼2013-08-30 21:10:22
小小亚杰
木虫 (正式写手)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助！ 2013-08-30 23:43:55
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laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助！ 2013-08-30 23:43:55
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1、绝对染菌了！！！ 培养基一定要采取高压灭菌，你隔着瓶子照照紫外是没用的。超净台里面的紫外灯只是能对直接照射到的台面和你瓶子的外表面起作用。而且整个操作过程中的枪头等也要高压灭菌！ 2、一般菌种都是用20%的甘油保存在-80℃冰箱内，你在4度放了5个月不一定再用液体能摇起来。如果摇起来了，你就涂个板，看看平板上长起来的菌是不是你要的黄杆菌。 好在楼主最后说了自己微生物学知识欠缺，不然我不能相信学微生物的敢这样操作。。。。请注意无菌操作，还有听听你师姐的建议。 |
3楼2013-08-30 22:06:49
4楼2013-08-31 10:23:17
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