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seaka

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1984643
注册: 2012-09-08
专业: 基础兽医学

[求助] pcr切单一目的带回收后电泳出现两条带，再切目的带回收电泳还是两条带已有1人参与

最近做pcr，扩增出目的带（较浅，2000多）及其他杂带（其中一条约1800，非常亮，咋一看以为是目的带）
切单一目的带胶回收后直接电泳，又出现两条带，即目的带(浅）和杂带（约1800那条，亮）
不死心，再切目的带回收，继续电泳还是一模一样两条带
第三次再回收，杂带还是很坚挺，目的带就没有了。。。。。

把第一次和第二次回收产物当模板做PCR,跑胶再看，1800的杂带还是很亮，目的带依旧很浅。

这会是什么原因呢，如果是PCR后再出现杂带好解释，明明跑开了两条带，切单一的回收直接电泳，就应该是单一条带啊。

求解惑，谢谢啦!

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1楼 2013-08-29 23:27:29

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978835147

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 3350487
注册: 2014-08-03
专业: 生物物理、生物化学与分子

【答案】应助回帖

问题解决了吗？我也在困扰，我最近也是这样的，头大了

赞一下

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12楼2015-09-14 22:00:18

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ninjakiss

银虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
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性别: MM
专业: 细胞生物学研究中的新方法

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
seaka(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-31 09:32:29

你遇上的这个问题好奇怪。。不过按道理来说，我一般胶回收的时候常常是回收亮的条带，较暗的一般按照杂带处理。所以比起你问的问题，我更觉得你也许换一下引物，摸一下最佳条件比较好。
本身切条带，我有的时候回收不回来，但是真没见到过你这个情况。我认为可能是你切的不是很整齐吧，可以多电泳一会，保证完整切下来目的条带为佳。有的时候可能会切成一个梯形，即上面你认为是你的目的条带，而下面较宽，粘连了较亮的杂带。我想到的只有这么多了。。。