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pcr切单一目的带回收后电泳出现两条带，再切目的带回收电泳还是两条带已有1人参与
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最近做pcr，扩增出目的带（较浅，2000多）及其他杂带（其中一条约1800，非常亮，咋一看以为是目的带） 切单一目的带胶回收后直接电泳，又出现两条带，即目的带(浅）和杂带（约1800那条，亮） 不死心，再切目的带回收，继续电泳还是一模一样两条带 第三次再回收，杂带还是很坚挺，目的带就没有了。。。。。 把第一次和第二次回收产物当模板做PCR,跑胶再看，1800的杂带还是很亮，目的带依旧很浅。 这会是什么原因呢，如果是PCR后再出现杂带好解释，明明跑开了两条带，切单一的回收直接电泳，就应该是单一条带啊。 求解惑，谢谢啦! |
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Huobol
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11楼2014-08-02 23:54:25
ninjakiss
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
seaka(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-31 09:32:29
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seaka(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-31 09:32:29
 你遇上的这个问题好奇怪。。不过按道理来说，我一般胶回收的时候常常是回收亮的条带，较暗的一般按照杂带处理。所以比起你问的问题，我更觉得你也许换一下引物，摸一下最佳条件比较好。本身切条带，我有的时候回收不回来，但是真没见到过你这个情况。我认为可能是你切的不是很整齐吧，可以多电泳一会，保证完整切下来目的条带为佳。有的时候可能会切成一个梯形，即上面你认为是你的目的条带，而下面较宽，粘连了较亮的杂带。我想到的只有这么多了。。。  |
2楼2013-08-30 14:24:48
3楼2013-08-30 16:21:40
4楼2013-09-01 09:31:19