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求放线菌基因组DNA的提取方法
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是高温放线Thermomonospora curvata,中文名称弯曲热单孢菌,用了网上查到的微波炉法（《微生物学报》），也许是我没有掌握到这种方法的精髓吧，反正是效果不太好，有时提不出，有时提出的极微量，现在实验就卡在这动不了了，崩溃死了。烦劳大家帮帮我吧！不胜感激了！ 后来用了分子克隆上的方法: (1〕取3ml培养过夜的细菌培养物离心0.5分钟，收集菌体； 〔2〕用无菌水洗涤菌体，12000rpm，离心1分钟； 〔3〕沉淀物加入567 u l TE（pH 8.0）缓冲液，重悬菌体，加入30 u l 溶菌酶（50mg/ml）混匀，于37℃温育1小时； 〔4〕加入30 u l 10%的SDS和3 u l （20mg/ml）的蛋白酶K，混匀，于55℃温育1小时； 〔5〕加入100 u l 5M Nacl, 充分混匀，再加入80 u l CTAB/Nacl 溶液，混匀，于65℃温育10min； 〔6〕 加入2ul RNA酶，37℃温浴15分钟； 〔7〕加入等体积的酚/氯仿，混匀，抽提； 〔8〕加入等体积的氯仿，抽提一次； 〔9〕 加入1/10体积的3mol/L NaAc 溶液，2倍体积的无水乙醇，混匀，放置－20℃冰箱30分钟； 〔10〕 轻轻混合直到DNA沉淀下来，离心； 〔11〕 用70%乙醇洗涤沉淀1次，晾干； 〔12〕将已干的DNA溶于40 u l 超纯水中，-20℃保存。 结果电泳出来还是没有,重复提了三天了,现在希望得到高手指教.... |
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2楼2007-11-16 12:22:45
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