| 查看: 1079 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
求放线菌基因组DNA的提取方法
|
|||
|
是高温放线Thermomonospora curvata,中文名称弯曲热单孢菌,用了网上查到的微波炉法（《微生物学报》），也许是我没有掌握到这种方法的精髓吧，反正是效果不太好，有时提不出，有时提出的极微量，现在实验就卡在这动不了了，崩溃死了。烦劳大家帮帮我吧！不胜感激了！ 后来用了分子克隆上的方法: (1〕取3ml培养过夜的细菌培养物离心0.5分钟，收集菌体； 〔2〕用无菌水洗涤菌体，12000rpm，离心1分钟； 〔3〕沉淀物加入567 u l TE（pH 8.0）缓冲液，重悬菌体，加入30 u l 溶菌酶（50mg/ml）混匀，于37℃温育1小时； 〔4〕加入30 u l 10%的SDS和3 u l （20mg/ml）的蛋白酶K，混匀，于55℃温育1小时； 〔5〕加入100 u l 5M Nacl, 充分混匀，再加入80 u l CTAB/Nacl 溶液，混匀，于65℃温育10min； 〔6〕 加入2ul RNA酶，37℃温浴15分钟； 〔7〕加入等体积的酚/氯仿，混匀，抽提； 〔8〕加入等体积的氯仿，抽提一次； 〔9〕 加入1/10体积的3mol/L NaAc 溶液，2倍体积的无水乙醇，混匀，放置－20℃冰箱30分钟； 〔10〕 轻轻混合直到DNA沉淀下来，离心； 〔11〕 用70%乙醇洗涤沉淀1次，晾干； 〔12〕将已干的DNA溶于40 u l 超纯水中，-20℃保存。 结果电泳出来还是没有,重复提了三天了,现在希望得到高手指教.... |
回复此楼» 猜你喜欢
药学求调剂
已经有10人回复
-
307中医考研调剂
已经有3人回复
-
271求调剂
已经有31人回复
-
291求调剂
已经有4人回复
-
山东省基金2026
已经有11人回复
-
一志愿华中农业071010，320求调剂
已经有10人回复
-
材料工程281还有调剂机会吗
已经有43人回复
-
291求调剂
已经有5人回复
-
085801电气专硕272求调剂
已经有18人回复
-
296求调剂
已经有11人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2007-11-16 12:22:45
liudanlucky
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 285
- 帖子: 104
- 在线: 2小时
- 虫号: 450252
- 注册: 2007-11-03
- 性别: MM
- 专业: 抗生素生物合成基因簇研究
3楼2007-11-21 21:22:27
4楼2007-11-25 17:24:22
