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lsxx金虫 (小有名气)
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用pPICZα A载体设计引物问题
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本人刚学做酵母表达实验，用的载体是pPICZα A，酵母菌是GS115，想表达一个基因片段大小在2.3kb的酶，想请教几个关于引物设计的问题，在设计引物时，1，如果目的片段没有Xho I酶切位点，是不是上游引物要带的限制性内切酶最好用Xho I啊，如果用了该酶，5‘端加了三个保护碱基，酶后面又加了AAAAGA Kex2蛋白酶切割位点，在后面是不是直接连接目的基因的5’端序列ATGNNNN就可以了？ 2，下游引物什么时候加（His）*6tag啊？pPICZα A载体本身不是含有（His）*6tag的吗？ |
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20083630zhan
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【答案】应助回帖
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貌似pPICZα A 的信号肽上面有Xhol 酶切位点，如果你的目的片段上面有Xho1 酶切位点的话，你酶切连接的时候，会将你的信号肽切掉，这样，如果你的目的蛋白是分泌型的话，会影响你的分泌效率。如果的的目的蛋白需要纯化，或者是进行其他的实验，那么你的目的蛋白需要有His.6，这样过镍柱时候可以进行纯化，但是，这个不需要你加，载体本来就带的，只要保证期间没有终止子就可以了 |
2楼2013-08-27 20:11:21