| 查看: 1077 | 回复: 1 | ||
lsxx金虫 (小有名气)
|
[求助]
用pPICZα A载体设计引物问题
|
|
本人刚学做酵母表达实验，用的载体是pPICZα A，酵母菌是GS115，想表达一个基因片段大小在2.3kb的酶，想请教几个关于引物设计的问题，在设计引物时，1，如果目的片段没有Xho I酶切位点，是不是上游引物要带的限制性内切酶最好用Xho I啊，如果用了该酶，5‘端加了三个保护碱基，酶后面又加了AAAAGA Kex2蛋白酶切割位点，在后面是不是直接连接目的基因的5’端序列ATGNNNN就可以了？ 2，下游引物什么时候加（His）*6tag啊？pPICZα A载体本身不是含有（His）*6tag的吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有79人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酶切及构建载体问题
已经有26人回复
20083630zhan
木虫 (正式写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 2739.2
- 散金: 39
- 帖子: 376
- 在线: 332小时
- 虫号: 2009205
- 注册: 2012-09-18
- 性别: GG
- 专业: 有机金属化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-27 21:48:30
lsxx: 金币+2, ★有帮助 2013-09-04 18:45:49
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-27 21:48:30
lsxx: 金币+2, ★有帮助 2013-09-04 18:45:49
|
貌似pPICZα A 的信号肽上面有Xhol 酶切位点，如果你的目的片段上面有Xho1 酶切位点的话，你酶切连接的时候，会将你的信号肽切掉，这样，如果你的目的蛋白是分泌型的话，会影响你的分泌效率。如果的的目的蛋白需要纯化，或者是进行其他的实验，那么你的目的蛋白需要有His.6，这样过镍柱时候可以进行纯化，但是，这个不需要你加，载体本来就带的，只要保证期间没有终止子就可以了 |
2楼2013-08-27 20:11:21
30