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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于T4连接酶 大家交流下
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ivyvampire

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-08-28 22:46:33
我发现咱做的挺像的 都是大载体 能麻烦你说一下具体的步骤吗 我第一次使用这个酶 心里没底 导师有催的急 谢谢哈譬如说你的摩尔比都设的多少等等...

我和你用的一样的酶。也是大于10K载体，推荐摩尔比1：10，然后连接过夜，载体和目的片段浓度高点，我连了十几个了，没有连不上的
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11楼2013-09-03 17:48:13
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569323315

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by greenygreen at 2013-08-28 20:19:02
我一直用NEB的T4呢~觉得比别家都好用。正常连接。控制好插入片段的浓度，高点好！10:1或者更高些。我都是控制在10ul 的连接体系，16度16小时，4度2小时。然后就直接将10ul 的连接产物全部转化DH5a感受态。热击法就行 ...

亲   你好   看到你的回复 对我帮助很大   我想再麻烦请教一个问题哈   亲说的 10：1 是什么意思呢   DNA与T4liganse 的比例吗？？ 谢谢
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12楼2015-11-30 09:36:41
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