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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hyy似水骄阳

铁虫 (小有名气)

[交流] 亚细胞定位载体如何构建

Sample Text
求助!!!!
  我要做乙烯相关基因的亚细胞定位,是要转化拟南芥,不知道载体怎么构建,只知道要汗GFP的载体,我要选个什么质粒啊??质粒中是不是就包含了EGFP啊??
另外EGFP是表达在蛋白的n端还是c端是什么意思?
EGFP融合在蛋白的N、还是C端又是啥意思???
谢谢各位大仙,我是新手一枚!
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foumer

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hyy似水骄阳 at 2013-09-01 20:17:52
GUS标记基因是载体上带的还是我自己连接上的??
还有目的基因连载gfp前后有啥区别么?
我看好多人都用pEGFP-c3和pEGFP-n1...

一般载体上有GUS, 我一般是用显微镜观察后再做GUS 染色后进行验证。载体随你选择啦,只要你的目的基金和GFP读码框准确,在前和后都应该没有问题,看你拿到是是啥载体。载体的话,就看你的本事啦,能要到或者买到啥载体就用啥载体好了。没有太大差异,我认为。我的载体是从一个熟悉的老师要的,所以就用这个了。
grasp all,loss all
6楼2013-09-02 02:32:48
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hyy似水骄阳

铁虫 (小有名气)

亲们,帮帮忙好不
3楼2013-08-29 19:38:31
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foumer

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hyy似水骄阳 at 2013-08-29 19:38:31
亲们,帮帮忙好不

是的,亚细胞定位的表达载体就是让你的目的基金和GFP或其他报告基金在强启动子的作用下,共表达(目的基因和gfp串联在一块,启动子诱导他们一块表达),同时含有GUS 标记基因也是很重要。我用的是Cam35S-gfp载体。直接采用酶切法,将你的目的基因的ORF克隆到GFP前面,基因枪或者农杆菌介导转到植物上就ok或者洋葱表皮细胞就ok。
grasp all,loss all
4楼2013-09-01 07:04:43
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hyy似水骄阳

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by foumer at 2013-09-01 07:04:43
是的,亚细胞定位的表达载体就是让你的目的基金和GFP或其他报告基金在强启动子的作用下,共表达(目的基因和gfp串联在一块,启动子诱导他们一块表达),同时含有GUS 标记基因也是很重要。我用的是Cam35S-gfp载体。直 ...

GUS标记基因是载体上带的还是我自己连接上的??
还有目的基因连载gfp前后有啥区别么?
我看好多人都用pEGFP-c3和pEGFP-n1
5楼2013-09-01 20:17:52
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