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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 亚细胞定位载体如何构建
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hyy似水骄阳

铁虫 (小有名气)

[交流] 亚细胞定位载体如何构建

Sample Text
求助！！！！
  我要做乙烯相关基因的亚细胞定位，是要转化拟南芥，不知道载体怎么构建，只知道要汗GFP的载体，我要选个什么质粒啊？？质粒中是不是就包含了EGFP啊？？
另外EGFP是表达在蛋白的n端还是c端是什么意思？
EGFP融合在蛋白的N、还是C端又是啥意思？？？
谢谢各位大仙，我是新手一枚！
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1楼 2013-08-26 13:46:15
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hyy似水骄阳

铁虫 (小有名气)
亲们，帮帮忙好不
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3楼2013-08-29 19:38:31
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foumer

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hyy似水骄阳 at 2013-08-29 19:38:31
亲们，帮帮忙好不

是的，亚细胞定位的表达载体就是让你的目的基金和GFP或其他报告基金在强启动子的作用下，共表达(目的基因和gfp串联在一块，启动子诱导他们一块表达），同时含有GUS 标记基因也是很重要。我用的是Cam35S-gfp载体。直接采用酶切法，将你的目的基因的ORF克隆到GFP前面，基因枪或者农杆菌介导转到植物上就ok或者洋葱表皮细胞就ok。
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grasp all,loss all
4楼2013-09-01 07:04:43
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hyy似水骄阳

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by foumer at 2013-09-01 07:04:43
是的，亚细胞定位的表达载体就是让你的目的基金和GFP或其他报告基金在强启动子的作用下，共表达(目的基因和gfp串联在一块，启动子诱导他们一块表达），同时含有GUS 标记基因也是很重要。我用的是Cam35S-gfp载体。直 ...

GUS标记基因是载体上带的还是我自己连接上的？？
还有目的基因连载gfp前后有啥区别么？
我看好多人都用pEGFP-c3和pEGFP-n1
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5楼2013-09-01 20:17:52
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foumer

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hyy似水骄阳 at 2013-09-01 20:17:52
GUS标记基因是载体上带的还是我自己连接上的？？
还有目的基因连载gfp前后有啥区别么？
我看好多人都用pEGFP-c3和pEGFP-n1...

一般载体上有GUS, 我一般是用显微镜观察后再做GUS 染色后进行验证。载体随你选择啦，只要你的目的基金和GFP读码框准确，在前和后都应该没有问题，看你拿到是是啥载体。载体的话，就看你的本事啦，能要到或者买到啥载体就用啥载体好了。没有太大差异，我认为。我的载体是从一个熟悉的老师要的，所以就用这个了。
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grasp all,loss all
6楼2013-09-02 02:32:48
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