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sinopet铁杆木虫 (著名写手)
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食品污染，帮忙看看可能是那种细菌？
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面食表面，粘湿，大红色，易擦去，略有霉味。有对此熟悉的同学吗？可能是哪个属的细菌？怎么鉴定比较简易便捷？ mmexport1377180071018.jpg |
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wzq_ing
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2楼2013-08-23 09:11:59
skpom
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【答案】应助回帖
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sinopet: 金币+2, ★有帮助 2013-09-02 08:21:54
sinopet: 金币+2, ★有帮助 2013-09-02 08:21:54
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应该是霉菌， 细菌可能性较小，以为细菌产色素较慢，看这片子不可能是细菌， 建议涂个平板分离纯化一下，通过生理生化鉴定，结合16RDNA鉴定 一、DNA的提取 1、细菌培养：细菌接种于5ml液体培养基中，37度培养2天 2、菌体收集：取1.5ml离心管加入1.5ml菌液12000r/min离心1分钟，收集菌体，去尽培养菌，在沉淀中加入500微升的TE缓冲液，用吸管反复吹打使之悬浮。 3、将其放入-20度冰箱反复冻融3-4次，融时将其放入热水融化，60度左右。 4、加入60微升10%SDS和10微升20mg/ml蛋白酶K混匀，于37度水浴反应1h。 5、加入100微升浓度为10mol/L CTAB溶液及80微升浓度为5mol/L Nacl溶液混匀65度水浴保温20分钟，得到粗提取液。 6、在此粗提液中加入等体积酚氯仿异戊醇（体积比25:24:1）颠倒混匀5分钟在转速12000r/min离心10分钟，取上清并加入氯仿异戊醇（24:1）颠倒混匀，12000r/min离心5-10分钟弃下层物，重复一次。 7、吸取上清，加两倍体积的无水乙醇和1/10体积的3M醋酸钠-20度放置1小时或过夜。在转速12000r/min离心10分钟，弃去上清得到DNA沉淀。 8、用70%的乙醇（大约1ml）洗涤DNA沉淀两次，并在空气中自然干燥或风干。 9、最后用30-60微升已灭菌的ddH2o溶解DNA，并加入适量的RNaseA，37度半小时除去RNA杂质，电泳检测，放入-20度保存。 二、PCR检测并大量扩增 1. 在 PCR 反应管中配置 50μL 反应体系：5μL 10×buffer，4μL dNTPs，两种引物各0.5μL，2μL DNA 模板（或 1μL 异养细菌纯培养菌液），0.25μL Taq DNA 聚合酶，其余体积以无菌超纯水补足。每次 PCR 反应中均设置作为参照的阴性样品，即反应溶液中以相等体积的无菌超纯水替代 DNA 模板； 2. 将 PCR 反应管放置于扩增仪进行反应，扩增条件为：94℃热启动 3min，30 个循环为 94℃变性 30s，58℃退火 45s，72℃延伸 105s；最后一个循环结束后 72℃延伸7min； |
3楼2013-08-30 11:39:02
sinopet
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