应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关Ni Bestarose HP柱材的再生
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
41/1返回列表
查看: 1011  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

396101466

金虫 (正式写手)

[交流] 有关Ni Bestarose HP柱材的再生

如题，我用的是Ni Bestarose HP柱材，纯化His标记的蛋白，初次使用的时候好像效果还好，目前目标蛋白结合不上柱子，所以想问问有没有关于Ni柱再生的方面的操作或者是手册什么的，希望贡献一下！谢谢各位！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

Ni柱再生方法

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-08-22 10:58:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yakir

银虫 (小有名气)
★
396101466(金币+1): 谢谢参与
Ni 柱重生一般常用的步骤是：
1.  ddH2O洗5CV，6M盐酸胍洗1-2CV（这里流速慢点，浸泡也行的，我一般第一个CV泡1h，再加等体积的盐酸胍浸泡2h），多洗点柱体积就更好了。如果填料实在很脏的话，可以用NaOH洗，但要先查找该款Ni柱的基架耐受的NaOH浓度。
2. ddH2O洗10CV，然后用100mM EDTA洗1-2CV（流速要慢点，要把Ni柱洗白，Ni充分的被EDTA螯合下来）
3. ddH2O洗10CV，然后用200mM NiSO4上柱1-2CV（流速要慢，让Ni充分挂柱，或者1CV直接浸泡过夜也行）
4. ddH2O洗10CV，然后20%乙醇洗2CV，4度保存即可。   以上柱体积的量可以适当增加点，效果更好点。

还有就是蛋白不挂柱子，不一定就是柱子的问题，有可能是蛋白本身的问题，也有可能是缓冲液不合适影响了蛋白的性质。如果真是填料一点都不结合目的蛋白，那柱子得有多脏啊。。。。你可以取点柱子，加点loading buffer煮一下，跑个SDS-PAGE看看，是否上面残留量很多蛋白，当然柱子看起来得是蓝色/绿色的，确认还有Ni的存在。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-22 13:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

396101466

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yakir at 2013-08-22 13:42:14
Ni 柱重生一般常用的步骤是：
1.  ddH2O洗5CV，6M盐酸胍洗1-2CV（这里流速慢点，浸泡也行的，我一般第一个CV泡1h，再加等体积的盐酸胍浸泡2h），多洗点柱体积就更好了。如果填料实在很脏的话，可以用NaOH洗，但要先 ...

谢谢，我确定是柱材的问题，不是蛋白的问题！
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-26 13:57:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
yingying15883楼
2013-08-22 20:54   回复  
396101466(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 396101466 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 083000学硕274求调剂 +5 Li李鱼 2026-03-26 5/250 2026-03-27 23:17 by mmm just
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 材料求调剂 +8 @taotao 2026-03-21 8/400 2026-03-27 11:21 by wangjy2002
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +5 SYA！ 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +4 YYYYYNNNNN 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:00 by macy2011
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭