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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 真核表达
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yixing897577

新虫 (小有名气)

[求助] 真核表达

各位虫友，请问如果不需要做转基因，pET-30a构建的载体是否能在花粉管中表达，有没有人做过类似的实验？
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1楼 2013-08-21 20:22:05
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yixing897577: 金币+5 2013-08-22 10:12:53
pET-30a是原核表达载体，不能在真核中表达吧1
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2楼2013-08-21 23:20:06
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yixing897577

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-21 23:20:06
pET-30a是原核表达载体，不能在真核中表达吧1

似乎您也不是很确定，但还是谢谢你！
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3楼2013-08-22 10:12:47
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Sthunder

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yixing897577 at 2013-08-22 10:12:47
似乎您也不是很确定，但还是谢谢你！...

不是不确定，你这个载体的多克隆位点上游就一个T7启动子，是根本无法在植物中表达的！
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互助互励，共奋共进！！
4楼2013-08-22 21:14:06
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yixing897577

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-22 21:14:06
不是不确定，你这个载体的多克隆位点上游就一个T7启动子，是根本无法在植物中表达的！...

如果我在多克隆位点上加一个花粉特异启动子呢？
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5楼2013-08-23 08:39:01
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Sthunder

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yixing897577 at 2013-08-23 08:39:01
如果我在多克隆位点上加一个花粉特异启动子呢？...

pET系列都是原核表达系统，是不能够成功转化到植物中进行表达的，即使加入真核启动子。建议楼主用植物表达载体比如pBI121，pGWB8，这些载体一般都是35S强启动子，如果你需要花粉特异表达的话，就用一个特异启动子替代35S。 Good luck！
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6楼2013-08-23 21:14:43
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yixing897577

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-23 21:14:43
pET系列都是原核表达系统，是不能够成功转化到植物中进行表达的，即使加入真核启动子。建议楼主用植物表达载体比如pBI121，pGWB8，这些载体一般都是35S强启动子，如果你需要花粉特异表达的话，就用一个特异启动子替 ...

非常感谢！
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7楼2013-08-23 21:37:52
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