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yixing897577

新虫 (小有名气)

[求助] 真核表达

各位虫友,请问如果不需要做转基因,pET-30a构建的载体是否能在花粉管中表达,有没有人做过类似的实验?
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yixing897577: 金币+5 2013-08-22 10:12:53
pET-30a是原核表达载体,不能在真核中表达吧1
互助互励,共奋共进!!
2楼2013-08-21 23:20:06
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yixing897577

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-21 23:20:06
pET-30a是原核表达载体,不能在真核中表达吧1

似乎您也不是很确定,但还是谢谢你!
3楼2013-08-22 10:12:47
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Sthunder

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yixing897577 at 2013-08-22 10:12:47
似乎您也不是很确定,但还是谢谢你!...

不是不确定,你这个载体的多克隆位点上游就一个T7启动子,是根本无法在植物中表达的!
互助互励,共奋共进!!
4楼2013-08-22 21:14:06
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yixing897577

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-22 21:14:06
不是不确定,你这个载体的多克隆位点上游就一个T7启动子,是根本无法在植物中表达的!...

如果我在多克隆位点上加一个花粉特异启动子呢?
5楼2013-08-23 08:39:01
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Sthunder

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yixing897577 at 2013-08-23 08:39:01
如果我在多克隆位点上加一个花粉特异启动子呢?...

pET系列都是原核表达系统,是不能够成功转化到植物中进行表达的,即使加入真核启动子。建议楼主用植物表达载体比如pBI121,pGWB8,这些载体一般都是35S强启动子,如果你需要花粉特异表达的话,就用一个特异启动子替代35S。 Good luck!
互助互励,共奋共进!!
6楼2013-08-23 21:14:43
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yixing897577

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-23 21:14:43
pET系列都是原核表达系统,是不能够成功转化到植物中进行表达的,即使加入真核启动子。建议楼主用植物表达载体比如pBI121,pGWB8,这些载体一般都是35S强启动子,如果你需要花粉特异表达的话,就用一个特异启动子替 ...

非常感谢!
7楼2013-08-23 21:37:52
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