| 查看: 289 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者shucaiyuanyi将赠送您 1 个金币 | |||
shucaiyuanyi银虫 (小有名气)
|
[求助]
求助菌落PCR的技术流程
|
||
|
求助菌落PCR的技术流程 查了好多资料,都没有详细的技术流程,希望各位帮下忙啊 , 在下感激不尽!! |
回复此楼» 猜你喜欢
求调剂
已经有3人回复
-
材料277求调剂
已经有7人回复
-
数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨
已经有5人回复
-
291求调剂
已经有21人回复
-
一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分
已经有8人回复
-
药学105500求调剂
已经有3人回复
-
考研调剂
已经有4人回复
-
0703化学
已经有7人回复
-
学硕274求调剂
已经有6人回复
-
321求调剂
已经有6人回复
2楼2007-11-13 11:04:44
随风而过
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 497.5
- 帖子: 169
- 在线: 41分钟
- 虫号: 447412
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
|
1．取适量PCR薄壁管，置于冰上，每管先加入17.3ul的灭菌水。 2．用灭过菌的10ul小枪头挑取单克隆白斑至灭菌水中，振荡混匀。 3．依次加入： 10xbuffer 2.5 Mgcl2(25mM) 1.8 DNTP(2.5mM) 1 3'引物（10pmol） 1 5'引物（10pmol） 1 Taq酶 0.4 total 25ul 各试剂均加好后，离心机上甩一下，使之沉底，置于PCR仪上 4．94℃，2min。 5． 94℃ 4分钟 94℃ 40秒 53.6℃ 40秒（此步骤温度视设计引物而定） 72℃ 4分钟 30-35个循环 72℃ 10分钟 4℃ 6．待PCR反应进入4℃后，取下PCR薄壁管，取7ulPCR产物加入3ul溴芬兰跑电泳，同时上1Kb DNA ladder。半小时后照相，观察胶图，根据胶图粗略鉴定插入片段的大小及小片段率。 7．将快速鉴定和菌落PCR检测合格的文库送检。 |
3楼2007-11-13 13:45:03
noblerenhb
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1654.8
- 帖子: 185
- 在线: 2.2小时
- 虫号: 442630
- 注册: 2007-10-27
- 性别: GG
- 专业: 化学工程
4楼2007-11-13 13:58:50
noblerenhb
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1654.8
- 帖子: 185
- 在线: 2.2小时
- 虫号: 442630
- 注册: 2007-10-27
- 性别: GG
- 专业: 化学工程
5楼2007-11-13 14:01:06
shucaiyuanyi
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 243.3
- 红花: 1
- 帖子: 91
- 在线: 23.1小时
- 虫号: 447430
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 蔬菜学与瓜果学
6楼2007-11-13 22:53:53
