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关于酶学参数测定
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小弟最近表达和纯化了一批蛋白,下面需要进行酶学分析,需要测定它们的酶学参数,在测定之前需要测定一下酶的活性,万一没有活性我就不需要进一步测定了,在看文献(博士论文)中提到说测定比活,得到了一个线性的酶活性图,然后作者说相关系数在0.99以上,符合参数测定条件,于是小弟很迷糊。。。 Q1:比活测定方法主要是两种,终点法和连续监测法,终点法要求时间一般在30min-60min间,正常来说数据也不该是线性啊。因为反应不是有三个阶段吗,中间的那一段才是线性啊 Q2:酶活(比活)应该达到怎样的情况才可以进行Vmax和Km值的测定呢,有规定吗? Q3为了控制我的反应体系吸光度值不要太大(我测的是底物减少的情况),所以底物初浓度需要被控制,都是uM级的,这种级数可以吗 [ Last edited by 1949stone on 2013-8-19 at 23:34 ] |
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