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[交流]
关于酶学参数测定
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小弟最近表达和纯化了一批蛋白，下面需要进行酶学分析，需要测定它们的酶学参数，在测定之前需要测定一下酶的活性，万一没有活性我就不需要进一步测定了，在看文献（博士论文）中提到说测定比活，得到了一个线性的酶活性图，然后作者说相关系数在0.99以上，符合参数测定条件，于是小弟很迷糊。。。 Q1：比活测定方法主要是两种，终点法和连续监测法，终点法要求时间一般在30min-60min间，正常来说数据也不该是线性啊。因为反应不是有三个阶段吗，中间的那一段才是线性啊 Q2：酶活（比活）应该达到怎样的情况才可以进行Vmax和Km值的测定呢，有规定吗？ Q3为了控制我的反应体系吸光度值不要太大（我测的是底物减少的情况），所以底物初浓度需要被控制，都是uM级的，这种级数可以吗 [ Last edited by 1949stone on 2013-8-19 at 23:34 ] |
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