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重叠pcr
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本人做重叠pcr，引物结合部位是30bp，完全互补，用pfu酶第一轮pcr结果大概是1000bp，条带清晰正确，切胶回收，测过浓度之后，将其稀释到10ng/ul做模板，用50ul体系各加1ul做模板，温度梯度也做了，pcr结果老是只有一条链的长度，要不就是弥散的。 请我一下：重叠pcr是和平常的pcr一样做吗？还是想有人说的先做3-5各循环，然后再加入两端引物呢？？？ 退火的温度与互补的引物Tm值之间有什么关系吗？ 模板量大概是多少呢？ 做了一个暑假了，就卡在这个问题上了，快郁闷死了！ 请做过的朋友不吝赐教，先谢谢哈！！！ |
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snoopyzxx
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2楼2013-08-18 09:11:55