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hugh_hang至尊木虫 (正式写手)
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[求助]
要用HPLC测微藻粉内 葡萄糖 氨基酸 脂肪酸 含量
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如题，我做的课题要测微藻细胞内 葡萄糖 3种氨基酸 4种脂肪酸 的含量，老板说用高效液相色谱HPLC可以测定，要我查样品要怎样处理才能测定。 以前用化学方法测的时候我们仅对藻粉做了溶解&破细胞壁的处理后就按相应方法测定了，但我没接触过HPLC，所以想问一下要HPLC测定要怎样处理样品？同一样品测定以上三类物质的处理有何不同，测了比如葡萄糖后的样品能否再测脂肪酸？或者哪些物质的测定是可以一起处理一起测定的？ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2013-08-19 19:45:06
hugh_hang: 回帖置顶 2014-03-14 15:40:25
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laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2013-08-19 19:45:06
hugh_hang: 回帖置顶 2014-03-14 15:40:25
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材料与方法1.1 仪器设备 Agilent1100高效液相色谱仪，包 括：真空脱气机、双元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器（FLD）和化学工作站，美国Agilent公司；电热恒温干燥箱（最高温度350℃，控温精度±1℃），日本Yamato公司；高速 台式离心机（最大转速14000r/min）， 德国Hettich公司；旋转蒸发器，德国IKA公司。 1.2试剂及配制甲醇、乙腈（色谱纯），美国Fish-er公司；NaH2PO4·H2O（分析纯），美国Sigma-Aldrich公司；硼酸缓冲液、邻苯二甲醛（OPA）、氯甲酸芴甲酯（FMOC）和17种氨基酸标准混合液，包括：丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙 氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸，Ag-ilent公司；色氨酸和内标戊氨酸，美国Sigma-Aldrich公司。HCl（优级纯）、巯基乙醇、NaOH（分析纯），北京化学试剂厂；水为双蒸水。 内标溶液配制：准确称取适量戊氨酸，用0.1mol/LHCl配制成浓度为50mmol/L的内标贮存液，临用时稀释。 氨基酸混合标准液的配制：准确称取适量色氨 酸，用0.1mol/LHCl配制成浓度为18mmol/L的贮 存液，临用时稀释。将不同浓度的17种氨基酸混合标准液与适当浓度的戊氨酸和色氨酸溶液按一定比 例混合，配制成浓度分别为4.5、45、225、450和1000μmol/L的氨基酸混合标准溶液（内标戊氨酸 浓度均为250μmol/L）。 冬虫夏草样品：分别产自青海省果洛州和玉树州、四川甘孜州、贵州铜仁市和西藏那曲县，由吉林大学生命科学学院提供。 1.3样品制备水解氨基酸样品制备按照参考 文献［7］ 中样品制备项下样品酸水解法进行。 1.4 色谱条件色谱柱：ZorbaxEclipseAAAC18 柱， 75mm×4.6mm，3.5μm。流动相A：40mmol/LNaH2PO4·H2O溶液，pH=7.8。流动相B：乙腈/甲 醇/水=45/45/10（v/v）。流动相梯度洗脱程序：0.0～1.0min（B：0%），1.0～9.8min（B：0%～57%），9.8～10.0min（B：57%～100%），10.0～12.0min（B：100%），12.0～12.5min（B：100%～0%）， 12.5～14.0min（B：0%）。流速：2mL/min。柱温：40℃。DAD检测波长：0～8.5min，紫外波长338nm（谱带宽10nm），参考波长390nm（谱带宽20nm）；FLD检测波长：0.0～8.5min（激发波长340nm，发射波长450nm），8.5～14.0min（激发波长266nm，发射波长305nm）。自动衍生程序：分别吸取2.5μL硼酸缓冲液和0.5μL标准溶液或样品水解液， 充分混合，静置30s；洗针；吸取0.5μLOPA充分混合；洗针；吸取0.5μLFMOC充分混合；吸取32μL水，充分混合；进样量18μL。 HPLC测定不同产地冬虫夏草中氨基酸的含量 都擦不多 |
4楼2013-08-16 20:46:03
hugh_hang
至尊木虫 (正式写手)
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2楼2013-08-16 09:10:30
laozuzunzhe
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3楼2013-08-16 10:37:52
hugh_hang
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5楼2013-08-17 18:40:27