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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sgh07ok

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


[交流] pET28表达蛋白的问题

用pET28表达三个蛋白,一样的酶切位点,其余两个都表达出来了,只有一个没有表达出来。PS:测序结果是三个蛋白序列完全正确的。有没有人能指点一下,找出原因:
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fliton

超级版主

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引用回帖:
19楼: Originally posted by ~艾斯~ at 2013-09-21 22:09:14
嗯,我前两天做了一个类似的实验,做着玩的,不过就是没有表达出来~比较郁闷~~应该跟IPTG没啥关系吧~因为我加了也是没有表达出来~

你是怎么检测的呀?考马斯亮蓝染色还是western检测?
23楼2013-10-31 15:11:13
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普通回帖

ms0321021

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!



sgh07ok(金币+1): 谢谢参与
最近我也需要做,但是你的问题我不懂
2楼2013-08-14 21:03:45
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Fleaves

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!



sgh07ok(金币+1): 谢谢参与
大小有差异,还是条件有差异?
3楼2013-08-15 00:47:29
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sgh07ok

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


引用回帖:
3楼: Originally posted by Fleaves at 2013-08-15 00:47:29
大小有差异,还是条件有差异?

只是大小有差异,别的都一样,克隆的酶切位点都是一样的
4楼2013-08-15 11:50:33
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Fleaves

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


引用回帖:
4楼: Originally posted by sgh07ok at 2013-08-15 11:50:33
只是大小有差异,别的都一样,克隆的酶切位点都是一样的...

估计你这个比较大吧
6楼2013-08-16 10:50:56
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sgh07ok

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


引用回帖:
6楼: Originally posted by Fleaves at 2013-08-16 10:50:56
估计你这个比较大吧...

不是啊,我的三个蛋白中,没表达出来的这个最小了,只有14kD
7楼2013-08-16 12:34:33
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hanmiao0122

主管区长

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
sgh07ok(金币+1): 谢谢参与
nono2009: 金币-10, 违规存档, 严禁回帖广告 2013-09-02 20:49:39
本帖内容被屏蔽

9楼2013-08-18 09:29:57
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aotoulan

兑换贵宾


sgh07ok(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

10楼2013-08-18 10:07:36
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sgh07ok

超级版主

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引用回帖:
10楼: Originally posted by aotoulan at 2013-08-18 10:07:36
我也遇到过这样的事,辛辛苦苦几个周,结果就没结果了。。。楼主可以试试改变表达温度时间等,或者重新构建表达

嗯,我试试重新构一个质粒
11楼2013-08-18 11:18:46
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gaofz487

超级版主


sgh07ok(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

14楼2013-08-30 22:56:20
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sgh07ok

主管区长

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引用回帖:
14楼: Originally posted by gaofz487 at 2013-08-30 22:56:20
应该是诱导条件的问题,可以换一下诱导培养基,调整诱导温度,IPTG浓度

嗯,现在就在摸索这些条件呢
15楼2013-08-31 13:37:21
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~艾斯~

管理员

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嗯,我前两天做了一个类似的实验,做着玩的,不过就是没有表达出来~比较郁闷~~应该跟IPTG没啥关系吧~因为我加了也是没有表达出来~
19楼2013-09-21 22:09:14
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wanghuanyi

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


我也遇到类似的问题 不知道怎么回事
20楼2013-09-23 21:46:49
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lksyb

超级版主

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什么来源的基因,会不会是稀有密码子的问题?
21楼2013-09-25 01:06:38
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testgfri

实习版主

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检查是否表达为包涵体,个人觉得低温诱导可以试试,也许有效,比如30度诱导过夜
22楼2013-10-29 16:41:18
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fliton

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


你是怎么检测的呀?考马斯亮蓝染色还是western检测?我也遇到了同样的问题,望共同进步呀
24楼2013-10-31 15:11:28
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~艾斯~

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


引用回帖:
23楼: Originally posted by fliton at 2013-10-31 15:11:13
你是怎么检测的呀?考马斯亮蓝染色还是western检测?...

啊,我那个转录里面有GFP,所以在紫外下看一眼有荧光绿就行~
25楼2013-11-01 08:25:27
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sxdthy

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


你是28a还是28b啊?是不是实验中的操作问题呢?建议多做几次,分子这个东西就是很奇怪,楼主攒攒人品吧
26楼2013-11-02 11:22:37
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wei-feng

实习版主

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请问楼主,你的蛋白多少个AA呀?
27楼2013-12-27 21:47:48
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简单回复
2013-08-15 22:48   回复  
sgh07ok(金币+1): 谢谢参与
neu2348楼
2013-08-17 09:28   回复  
sgh07ok(金币+1): 谢谢参与
2013-08-20 17:17   回复  
sgh07ok(金币+1): 谢谢参与
2013-08-20 21:02   回复  
2013-08-31 18:44   回复  
spbee17楼
2013-09-02 11:11   回复  
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nono200918楼
2013-09-11 07:11   回复  
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