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33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] Sac1这个酶切位点 已有6人参与

Sac1这个酶切位点,切割率2小时和20小时都是10%,为什么会那么低呀,有什么方法提高切割率吗?我必须用这个酶切位点,和别的酶切位点一起双酶切!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-13 14:42:22
你说的是指酶切位点在序列末端的情况还是buffer不合适?在最适合的条件下的切割率应该是100%
2楼2013-08-13 12:59:20
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个酶很好切的吧,你是不是看错了
3楼2013-08-13 17:08:02
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33ggdf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小丹木木 at 2013-08-13 17:08:02
这个酶很好切的吧,你是不是看错了

我添加了保护碱基,在添加保护碱基原则里面看到的这个切割率,没错的!难道是添加了保护碱基的原因??
4楼2013-08-13 20:33:07
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33ggdf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-13 12:59:20
你说的是指酶切位点在序列末端的情况还是buffer不合适?在最适合的条件下的切割率应该是100%

我指的是在序列末端的情况,因为之前我添加了保护碱基,我在添加保护碱基原理里面看到的这个切割率。
5楼2013-08-13 20:35:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-08-13 20:35:21
我指的是在序列末端的情况,因为之前我添加了保护碱基,我在添加保护碱基原理里面看到的这个切割率。...

设计酶切位点时尽量选加保护碱基后效率高的。如果实在必需用这个酶切位点的话,可以适当增加酶的用量。
6楼2013-08-13 21:54:19
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Sthunder

木虫 (正式写手)

如果加了保护碱基的话,就放心用吧,我用过N次,屡试不爽!!Good luck!
互助互励,共奋共进!!
7楼2013-08-13 23:11:17
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lifuzhu3838

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
只能说你用的是TAKARA的酶,这个日本货是最低端的酶。试试NEB的,就是贵一点。超高效,最好买红盖子的
活到老学到老
8楼2013-08-14 08:38:51
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花花贝

金虫 (知名作家)

这个酶没什么特别的
9楼2013-08-14 09:42:09
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33ggdf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-13 23:11:17
如果加了保护碱基的话,就放心用吧,我用过N次,屡试不爽!!Good luck!

其实我是做它和另一个酶的双酶切连接的,最近总是连接不上,所以就胡乱找原因咯!!我两个目的片段分别回收后,浓度才6.0纳克/微升,是不是有点低呀?摩尔比是1:3-1:10,连接时16℃过夜,涂皿再过夜,就是不长单菌落,是什么原因?抗性没用错。帮忙分析一下?
10楼2013-08-14 09:49:15
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