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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Sac1这个酶切位点
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33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] Sac1这个酶切位点 已有6人参与

Sac1这个酶切位点，切割率2小时和20小时都是10%，为什么会那么低呀，有什么方法提高切割率吗？我必须用这个酶切位点，和别的酶切位点一起双酶切！
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1楼 2013-08-13 12:11:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-13 14:42:22
你说的是指酶切位点在序列末端的情况还是buffer不合适？在最适合的条件下的切割率应该是100%
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2楼2013-08-13 12:59:20
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个酶很好切的吧，你是不是看错了
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3楼2013-08-13 17:08:02
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33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小丹木木 at 2013-08-13 17:08:02
这个酶很好切的吧，你是不是看错了

我添加了保护碱基，在添加保护碱基原则里面看到的这个切割率，没错的！难道是添加了保护碱基的原因？？
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4楼2013-08-13 20:33:07
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33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-13 12:59:20
你说的是指酶切位点在序列末端的情况还是buffer不合适？在最适合的条件下的切割率应该是100%

我指的是在序列末端的情况，因为之前我添加了保护碱基，我在添加保护碱基原理里面看到的这个切割率。
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5楼2013-08-13 20:35:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-08-13 20:35:21
我指的是在序列末端的情况，因为之前我添加了保护碱基，我在添加保护碱基原理里面看到的这个切割率。...

设计酶切位点时尽量选加保护碱基后效率高的。如果实在必需用这个酶切位点的话，可以适当增加酶的用量。
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6楼2013-08-13 21:54:19
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Sthunder

木虫 (正式写手)
如果加了保护碱基的话，就放心用吧，我用过N次，屡试不爽！！Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
7楼2013-08-13 23:11:17
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lifuzhu3838

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
只能说你用的是TAKARA的酶，这个日本货是最低端的酶。试试NEB的，就是贵一点。超高效，最好买红盖子的
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活到老学到老
8楼2013-08-14 08:38:51
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花花贝

金虫 (知名作家)
这个酶没什么特别的
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9楼2013-08-14 09:42:09
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33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-13 23:11:17
如果加了保护碱基的话，就放心用吧，我用过N次，屡试不爽！！Good luck！

其实我是做它和另一个酶的双酶切连接的，最近总是连接不上，所以就胡乱找原因咯！！我两个目的片段分别回收后，浓度才6.0纳克/微升，是不是有点低呀？摩尔比是1：3-1：10，连接时16℃过夜，涂皿再过夜，就是不长单菌落，是什么原因？抗性没用错。帮忙分析一下？
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10楼2013-08-14 09:49:15
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