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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 腹水 单抗纯化 没有效价
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ssyyll1019

铜虫 (小有名气)

[交流] 腹水 单抗纯化 没有效价

大家好，小弟最近纯化小鼠腹水单抗，碰到了一个奇怪的问题。
我用辛酸-硫酸铵方法纯化抗体，纯化前腹水ELISA 检测，显示有效价，但纯化后经PBS透析后，再检测，却没有效价了。
请问，这种情况是抗体失活了，纯化过程中ph没有极端变化（4.5-7.4之间），整个过程都是在4°下进行的。是什么情况导致纯化后的抗体失活了呢？
电泳图片SDS-PAGE  还原胶，感觉轻链条带很弱。
腹水 单抗纯化  没有效价
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1楼 2013-08-06 15:27:09
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wendy3

金虫 (文坛精英)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
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3楼2013-08-06 16:19:18
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lastpython

木虫 (职业作家)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
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4楼2013-08-06 16:19:20
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seeforme

新虫 (知名作家)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
深深祝福
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5楼2013-08-06 16:20:20
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niu.bi

木虫 (文坛精英)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
Good luck
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6楼2013-08-06 16:21:22
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wswsjz

木虫 (职业作家)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
Best wishes for you
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9楼2013-08-06 16:44:56
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cauxiaobear

新虫 (小有名气)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
应该是失活了！
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13楼2013-08-06 17:01:53
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yzwuhan

金虫 (小有名气)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
经常有的事，抗体结构被破坏了
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15楼2013-08-07 21:46:31
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水红蓝调

新虫 (小有名气)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
换一种纯化方式吧，不行用层析柱吧
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16楼2013-08-12 10:45:29
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zhangbighui

金虫 (正式写手)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
看你PAGE图条带很弱的，你这个纯化方法可以的，但要注透析法会损失很多蛋白，不知你纯化后有没有PAGE检测蛋白或都BAC法检测蛋白浓度。还有一问你抗体的效价检测方法是什么，我是用ELISA，如果抗体浓度很低或者没有摸好反应条件一样没有效价的。个人经验，希望对你有用。
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17楼2013-08-12 15:16:27
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wolfman840

木虫 (正式写手)
★
ssyyll1019(金币+1): 谢谢参与
是不是透析把轻链给透没了？你选的多少K的透析膜？另外，你纯化还用沉淀法啊，可以用预装的重力柱进行，效果比这个好。
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18楼2013-08-13 08:18:16
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lgp3032楼
2013-08-06 16:11   回复  
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lefantian1227楼
2013-08-06 16:26   回复  
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haixiawu8楼
2013-08-06 16:40   回复  
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黄山松5010楼
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yaoyao14511楼
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wlxiao12楼
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yingying158814楼
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mytheni19楼
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