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glzeng金虫 (小有名气)
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[交流]
求助，多肽的分离提纯
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各位虫友： 我在学校期间是做有机高分子材料的，现在在一家生物公司上班，最近在做一个多肽的合成，是用液相的方法聚合的，目标分子的分子量为5000－11000，粗产品已经拿到了，可现在我不知道该用哪种方法进行分离提纯。希望得到大家的帮助！ 我的一个思路是先用透析的方法除去小分子，这个我已经定购了截流量为5KDa的透析膜，但是大分子的去除现在成了问题，本来是想买PLCCC 10(截留量为30KDa)这种超滤膜进行超滤（现在做的量很小，<1g）,但是好象还需要一个叫Pellicon XL的装置，在不能确定这个项目能否做出来之前估计公司是不会购买的，不知道不用这个装置是不是也能做？如果能做该怎么做？ 另外一个思路是用凝胶过滤的方法进行分离，目前我手上有Sephadex G25, Sephadex G50两种凝胶，也用这种方法试了一下，但同样面临着滤液的监测问题（现在用的HPLC上的紫外监测器），我不知道什么时候出来的滤液才是我要的产品（分子量符合要求），大家有什么好的建议，请不吝赐教！谢谢大家了！ [search]分离提纯[/search] |
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glzeng
金虫 (小有名气)
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3楼2007-11-08 12:52:08
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hu66huhuhu
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karl2100(金币+1,VIP+0):3Q
karl2100(金币+1,VIP+0):3Q
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处理方法我认为比较合适，先过膜除小分子并到达浓缩效果。 下一步其实还是容易操作的，只是你那里实验条件限制，幸好还有SEPHADEX G系列。参考了您的实验条件，我提供几种方法： 1.能借到的话去借核酸蛋白检测器一台（调到254nm），台式记录仪一台，如果有色谱柱一根的话，装填SEPHADEX G（我记不清了，你要自己去查一下你那分子量范围用G的哪种填料合适），通过细管子连接在一起，做柱层析并辅与HPLC检测，很快搞定。 2.只能借到核酸、蛋白检测器一台，同上操作，只是你要守着，自己看检测仪上出峰时的数据变化。 3.什么都借不到。这就要辛苦一点了，同上操作装色谱柱，同上方法做柱层析，但接洗脱液的时候，根据色谱柱的体积接，每1BV接一瓶，然后HPLC检测。 |
5楼2007-11-09 17:04:52
