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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 壳聚糖修饰物做绿色荧光蛋白转染实验无效果，求教！
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xixi61887

金虫 (小有名气)

[求助] 壳聚糖修饰物做绿色荧光蛋白转染实验无效果，求教！

各位虫友，本人目前在做壳聚糖季铵盐修饰的转染实验，电势、粒径、琼脂糖凝胶电泳显示壳聚糖修饰物能够与DNA结合，表面正电，尺寸200-300nm，但是转染的时候孔板上一个孔内只有一两个有荧光的细胞，而PEI25KDa效果挺好，跟文献报道一致，质粒没问题。此种壳聚糖修饰物有文献报道转染效率较PEI好，但是我重复不出来，为这个实验已着急上火了快两个月了，如有类似经历或知晓解决办法的虫友，请您不吝赐教，感激不尽！
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1楼 2013-08-03 16:12:03
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-08-04 22:47:37
xixi61887(红舟流星代发): 金币+27, 代扣代发金币 2013-11-30 19:22:21
是不是壳聚糖季铵盐修饰密度不够？应该从材料上找原因。也有可能那个文献不靠谱
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2楼2013-08-04 15:39:44
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xixi61887

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuanan at 2013-08-04 15:39:44
是不是壳聚糖季铵盐修饰密度不够？应该从材料上找原因。也有可能那个文献不靠谱

您好！如果修饰度太大，毒性增大，细胞会死亡，请问如何解决呢？谢谢
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3楼2013-08-05 09:36:19
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
xixi61887: 金币+6, ★有帮助 2013-08-07 22:21:47
这就是开发新基因载体的时候最需要研究的核心问题和发文章的关键。修饰季铵盐的同时再修饰一些PEG试试。
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4楼2013-08-05 10:57:54
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xixi61887

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuanan at 2013-08-05 10:57:54
这就是开发新基因载体的时候最需要研究的核心问题和发文章的关键。修饰季铵盐的同时再修饰一些PEG试试。

谢谢您的回答。我其实试着修饰了别的东西以降低毒性，但是卡在转染这一步了，不论是参考文献还是再修饰，转染实验都做不出来，没荧光，请问您遇到多类似情况么？
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5楼2013-08-05 11:11:18
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