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间充质干细胞（MSC）用化学成分限定培养基鉴定方法
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MSC无血清培养基及化学成分限定培养基的产品很多，自818号令之后，国家规定干细胞及外泌体相关的产品均应按药品管理进行备案和申报。无血清或CD的间充质干细胞培养基对于治疗药物的控制至关重要；含血清和含血替的培养基能够促进细胞增长，但成分复杂，批次差异大，可能引起病原体和异种蛋白，增加安全风险。无血清或CD培养基成分明确可控，减少批次差异和污染风险。提升干细胞及外泌体相关产品体系的稳定性和安全性成为当前趋势。 市面上宣称的MSC无血清培养基产品很多，客户如何鉴定培养基不含血清（血替）对于快速筛选合格的培养基产品至关重要。 大多数的MSC无血清培养基一般都是由A,B组分构成的套装。如图1所示。A组分为基础培养基，500mL/瓶，2-8℃保存；B组分为添加剂，-20℃保存，添加量为3mL~25mL不等。此类培养基宣称添加了为多种重组蛋白或因子。 A,B组分需配合使用构成CD或无血清MSC培养基。如图2  该类培养基宣称无胰酶抑制剂成分，在传代过程中，胰酶或重组胰酶的作用可以通过稀释后离心去除，从而实现对细胞的连续传代培养。 要想鉴别此类培养基是否为真的无血清或CD培养基，可参考以下验证方法进行验证。 验证方法：该类培养基能否终止胰酶的作用？ 使用该类培养基对细胞传代时不终止不离心，按细胞数量或比例进行传代培养，看是否能带胰酶连续传代。 具体实验操作方法和结果如下：用某品牌的完全培养基按照有血清培养基的传代方法进行细胞传代，用0.25%猪源胰酶消化细胞后，不终止不离心。按照面积比1:6进行4次连续传代，4次连续传代后的细胞形态好，倍增能力强，终密度高。如图3所示。  讨论： CD或无血清（无血替）的培养基没有终止胰酶的作用，胰酶的残留累积会对细胞形成伤害，使细胞不能连续传代培养。离心的方法不能完全去除或终止胰酶作用，残留的胰酶会对细胞造成伤害。 含血清或血替培养基可以带胰酶连续传代培养，因为血清或血替中含有终止胰酶的成分。经验证血清或血替的含量≥0.5%，就可以不用终止不用离心进行连续传代。 使用该类培养基按照有血清培养基的传代方法进行传代，细胞可以连续传代，并且细胞形态好，倍增能力强，终密度高。 既然培养基中不含胰酶抑制剂，是什么成分终止了胰酶的消化？？？ |
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