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koukaidei

木虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 3771.7
红花: 2
帖子: 331
在线: 200.2小时
虫号: 1083951
注册: 2010-08-28
性别: MM
专业: 有机合成

[求助] 求助如何做好GPC标准曲线？

新手上路，又无人指导，在国外，盼高手不吝指教。
GPC仪器是岛津，
分析条件; 溶剂THF，流速1.0ml/min，有四根柱子。
标样的浓度是20 mg/ml，有5个，1000，2500， 5000，11000， 17000。
每次进样5ul.
自己的样品大约在1000-2000左右。
自己制作了几次标准曲线，怎么总是有相差呢？请指教哪些地方操作不对！
附上刚做的标样图谱。

0801-2.jpg

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1楼2013-08-01 15:53:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

mrzhang77

金虫 (正式写手)

应助: 125 (高中生)
金币: 715.4
红花: 4
帖子: 301
在线: 56.9小时
虫号: 415448
注册: 2007-06-29
性别: GG
专业: 高分子合成化学

【答案】应助回帖

★ ★
koukaidei: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-06 09:00:16

引用回帖:

9楼: Originally posted by koukaidei at 2013-08-02 08:07:25
非常感谢你的回复。我是在日本，试试你的方法。
我的操作有问题吗？为什么我的样品浓度要用那么大呢？要是用10mg/ml的话，峰出的特别低，这是为什么啊？我发现样品浓度高的时候（40 mg/ml)，出峰时间会向前移动， ...

你最好看看高分子方面的书会有帮助的。做SEC的时候，峰出来的位置和浓度确实有点关系，要看分子链在溶液中是伸展开的还是没有完全伸展开的，这样它通过柱子中微孔胶体的速度不同，流出时间也就会不同。我们配的样品溶液浓度一般在3-5mg/mL，你配的溶液太浓了，反而不好，容易把柱子堵了。我之前想提醒你这点，但是忘了。你可以把注射量增加，这要根据机器类型决定，我们的机器是自动注射，注射量设定的是100µL