| 查看: 2088 | 回复: 12 | ||||
12108080银虫 (小有名气)
|
[求助]
量子点通过链霉亲和素-生物素反应连接抗体，怎么分离
|
|||
| 我的量子点上联有链霉亲和素，抗体上有生物素，现在想探索二者合适的比例使其充分连接，尽量减少浪费。但是我不知道用什么手段检测量子点是否结合上抗体，结合了多少。 所以请教大牛，通常用什么方法检测？ 还有，有没有什么方法，能把我需要的偶联抗体的量子点分离出来呢？各位出来帮帮忙呀，刚开始做实验一个月了还两眼抓瞎呢 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 | 精华帖收集 |
» 猜你喜欢
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有4人回复
-
基金申报
已经有3人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有9人回复
-
溴的反应液脱色
已经有6人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有7人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
-
推荐一本书
已经有10人回复
-
参与限项
已经有5人回复
-
有没有人能给点建议
已经有5人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急问:生物素(biotin)在60摄氏度下反应1小时会被破坏吗?还能与亲和素结合吗?
已经有9人回复
- 磁珠和抗体怎样连接？怎样证明连接成功？
已经有6人回复
- 【求助/交流】有关链霉亲和素和生物素
已经有18人回复
conanzzz
木虫 (正式写手)
- 应助: 76 (初中生)
- 金币: 4633.5
- 散金: 248
- 红花: 5
- 帖子: 524
- 在线: 383小时
- 虫号: 818114
- 注册: 2009-07-29
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
6楼2013-08-03 12:19:05
ty10086 
捐助贵宾 (小有名气)
- BioEPI: 1
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 1309.7
- 散金: 114
- 红花: 1
- 帖子: 228
- 在线: 277.2小时
- 虫号: 463845
- 注册: 2007-11-20
- 专业: 抗体工程学
7楼2013-08-04 13:29:56
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
|
你连接成功量子点没有？如果没有的话，我把量子点制备的proteocols发给你，我最近也在开展量子点方面的实验，不过不好意思，我可没有时间量子点制备的proteocols全部译成中文。 我就楼主提问提示如下： 一、分离链霉亲和素-量子点和生物素-抗体的聚合体： 1.用分子筛层析分离链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的地合体。你的量子点上联有链霉亲和素，抗体上有生物素，这就是一个受体-配体结合的实验检测，方法很多，用分子筛层析可以分离出链霉亲和素上和生物素-抗体形成的聚合体，先分别用两者游离状态走一遍分子筛层析，然后通过分子量的变化，可以分离出缔合体。 我不知道你用的是哪种量子点，一般的话，量子点的直径已经是4-10nm，再加上连接的生物分子，体积更大，用透析或者超滤可能无法只透过量子点，如果孔径能够透过量子点，可能蛋白质分子也会透过，所以不推荐使用透析或者超滤除去量子点。 2.Pull down分离链霉亲和素-量子点和生物素-抗体的聚合体。既然量子点-链霉亲和素结合到生物素-抗体上，那么你可以直接设计亲和抗体的那种Pull down，可以把链霉亲和素共价连接到层析柱上。就可以把两者的聚合体一起从溶液中拽出来。在洗脱到溶液里即可。但是洗脱时会有链霉亲和素-量子点和生物素-抗体的聚合体被拆解。 3.用超速离心分离链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的聚合体可以尝试，但是超速离心肯定会把一些链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的聚合体重新拆解开。 所以推荐分子筛层析。因为你是要分离出来分离链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的聚合体，而不是仅仅鉴定离职你跟着发生了聚合。 二、测定用什么手段检测量子点结合了多少抗体？ 当然要在第一步分离出来分离 链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体 的聚合体 之后再来做。 方法有很多种。说一种最简单的方法： 分子筛层析可以分离出链霉亲和素-量子点和生物素-抗体形成的聚合体，这步操作可以重复进行，多次混合链霉亲和素上和生物素-抗体，室温下温和搅拌，以便链霉亲和素上和生物素-抗体形成聚合体，然后走分子筛层析，多操作几次。提示一下：当链霉亲和素-量子点和生物素-抗体形成聚合体时，链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体两种物质首先要提纯，不然发生相互作用时干扰巨多。然后用紫外光谱仪测定游离的链霉亲和素-量子点的荧光强度，除以链霉亲和素-量子点的分子量，得出单个的链霉亲和素-量子点的荧光强度，再用荧光光谱仪测定链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的荧光强度，是先要测定出生物素-抗体的数量，然后测定出：用分子筛层析分离出的链霉亲和素-量子点和生物素-抗体的聚合体的荧光强度，这样除以单个的链霉亲和素-量子点的荧光强度，就能知道了量子点结合了多少抗体。 荧光强度会不会测定？ 不会的话，我告诉你具体方法。因为现在电子书不在我手里，我尚未回家，一会要去聚餐。  还有，我总体上认为你的实验可能走了很大的弯路，我知道量子点的具体用途，你没有必要即用链霉亲和素 - 生物素 ，又用抗体，因为抗体本身就可以为量子点在细胞内专一性结合抗原，而为把量子点带到特定细胞内位点，如果使细胞外实验就更简单了，要鉴定蛋白质或其他生物大分子，不用量子点也可以。你能否说说你的实验目的，可能我可以给你重新设一下实验，使你的实验流程简单一些。因为我就很懒，绝对不愿意繁琐的实验操作。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
1210808010楼2014-07-10 18:06:12
12108080
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1396.3
- 散金: 653
- 红花: 6
- 帖子: 290
- 在线: 89.4小时
- 虫号: 1119548
- 注册: 2010-10-11
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
2楼2013-08-01 20:19:10
conanzzz
木虫 (正式写手)
- 应助: 76 (初中生)
- 金币: 4633.5
- 散金: 248
- 红花: 5
- 帖子: 524
- 在线: 383小时
- 虫号: 818114
- 注册: 2009-07-29
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
3楼2013-08-02 17:29:52
12108080
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1396.3
- 散金: 653
- 红花: 6
- 帖子: 290
- 在线: 89.4小时
- 虫号: 1119548
- 注册: 2010-10-11
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
4楼2013-08-02 19:57:11
12108080
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1396.3
- 散金: 653
- 红花: 6
- 帖子: 290
- 在线: 89.4小时
- 虫号: 1119548
- 注册: 2010-10-11
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
5楼2013-08-02 19:57:48
12108080
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1396.3
- 散金: 653
- 红花: 6
- 帖子: 290
- 在线: 89.4小时
- 虫号: 1119548
- 注册: 2010-10-11
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
8楼2013-08-05 10:29:12
9楼2014-07-10 14:23:19