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量子点通过链霉亲和素-生物素反应连接抗体，怎么分离
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| 我的量子点上联有链霉亲和素，抗体上有生物素，现在想探索二者合适的比例使其充分连接，尽量减少浪费。但是我不知道用什么手段检测量子点是否结合上抗体，结合了多少。 所以请教大牛，通常用什么方法检测？ 还有，有没有什么方法，能把我需要的偶联抗体的量子点分离出来呢？各位出来帮帮忙呀，刚开始做实验一个月了还两眼抓瞎呢 |
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你连接成功量子点没有？如果没有的话，我把量子点制备的proteocols发给你，我最近也在开展量子点方面的实验，不过不好意思，我可没有时间量子点制备的proteocols全部译成中文。 我就楼主提问提示如下： 一、分离链霉亲和素-量子点和生物素-抗体的聚合体： 1.用分子筛层析分离链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的地合体。你的量子点上联有链霉亲和素，抗体上有生物素，这就是一个受体-配体结合的实验检测，方法很多，用分子筛层析可以分离出链霉亲和素上和生物素-抗体形成的聚合体，先分别用两者游离状态走一遍分子筛层析，然后通过分子量的变化，可以分离出缔合体。 我不知道你用的是哪种量子点，一般的话，量子点的直径已经是4-10nm，再加上连接的生物分子，体积更大，用透析或者超滤可能无法只透过量子点，如果孔径能够透过量子点，可能蛋白质分子也会透过，所以不推荐使用透析或者超滤除去量子点。 2.Pull down分离链霉亲和素-量子点和生物素-抗体的聚合体。既然量子点-链霉亲和素结合到生物素-抗体上，那么你可以直接设计亲和抗体的那种Pull down，可以把链霉亲和素共价连接到层析柱上。就可以把两者的聚合体一起从溶液中拽出来。在洗脱到溶液里即可。但是洗脱时会有链霉亲和素-量子点和生物素-抗体的聚合体被拆解。 3.用超速离心分离链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的聚合体可以尝试，但是超速离心肯定会把一些链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的聚合体重新拆解开。 所以推荐分子筛层析。因为你是要分离出来分离链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的聚合体，而不是仅仅鉴定离职你跟着发生了聚合。 二、测定用什么手段检测量子点结合了多少抗体？ 当然要在第一步分离出来分离 链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体 的聚合体 之后再来做。 方法有很多种。说一种最简单的方法： 分子筛层析可以分离出链霉亲和素-量子点和生物素-抗体形成的聚合体，这步操作可以重复进行，多次混合链霉亲和素上和生物素-抗体，室温下温和搅拌，以便链霉亲和素上和生物素-抗体形成聚合体，然后走分子筛层析，多操作几次。提示一下：当链霉亲和素-量子点和生物素-抗体形成聚合体时，链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体两种物质首先要提纯，不然发生相互作用时干扰巨多。然后用紫外光谱仪测定游离的链霉亲和素-量子点的荧光强度，除以链霉亲和素-量子点的分子量，得出单个的链霉亲和素-量子点的荧光强度，再用荧光光谱仪测定链霉亲和素-量子点 和 生物素-抗体的荧光强度，是先要测定出生物素-抗体的数量，然后测定出：用分子筛层析分离出的链霉亲和素-量子点和生物素-抗体的聚合体的荧光强度，这样除以单个的链霉亲和素-量子点的荧光强度，就能知道了量子点结合了多少抗体。 荧光强度会不会测定？ 不会的话，我告诉你具体方法。因为现在电子书不在我手里，我尚未回家，一会要去聚餐。  还有，我总体上认为你的实验可能走了很大的弯路，我知道量子点的具体用途，你没有必要即用链霉亲和素 - 生物素 ，又用抗体，因为抗体本身就可以为量子点在细胞内专一性结合抗原，而为把量子点带到特定细胞内位点，如果使细胞外实验就更简单了，要鉴定蛋白质或其他生物大分子，不用量子点也可以。你能否说说你的实验目的，可能我可以给你重新设一下实验，使你的实验流程简单一些。因为我就很懒，绝对不愿意繁琐的实验操作。 |
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1210808010楼2014-07-10 18:06:12
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