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齐美凤87

铁虫 (初入文坛)

[求助] 通过测定NADPH在340nm处的OD值的减少量反应酶活力

现在我在做一个体外实验NADPH是辅酶,为什么我的反应体系中没有加酶,只是加底物和NADPH,其OD值也在下降,这是为什么呢?我的反应体系体积200uL,NADPH的终溶度是0.5mM。请高手给我指教。
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laoguai123

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
河边的芦苇: 金币+1, 感谢回帖交流~ 2013-08-26 15:04:47
齐美凤87: 金币+5 2013-08-30 00:43:46
楼主可以试试加2-巯基乙醇试试,另外把空白的变化值减掉
加油,加油...
2楼2013-08-26 14:16:08
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齐美凤87

铁虫 (初入文坛)

好的,谢谢。我试下看,请问你做的是不是通过NADPH的减少量来反应酶的活性的?是关于BPH的吗?
3楼2013-08-30 00:43:10
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齐美凤87

铁虫 (初入文坛)

我看过在缓冲液中加2-巯基乙醇的,2-巯基乙醇是什么原理能使NADPH的OD值变化小些?
4楼2013-08-30 00:45:11
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laoguai123

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 齐美凤87 at 2013-08-30 00:45:11
我看过在缓冲液中加2-巯基乙醇的,2-巯基乙醇是什么原理能使NADPH的OD值变化小些?

NADPH在自然状态下容易被氧化分解,2-巯基乙醇是还原剂,可以减少氧化
加油,加油...
5楼2013-09-04 16:32:55
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齐美凤87

铁虫 (初入文坛)

非常感谢你的帮助。
6楼2013-09-04 21:08:57
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yuanziren

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 齐美凤87 at 2013-09-04 21:08:57
非常感谢你的帮助。

你好,请问你的问题解决了吗?我现在测GOGAT酶活也是遇到这个问题。我也是测NADPH的OD减少量,但是空白组和反应组的OD值都下降 ,而且速率几乎一样
7楼2014-07-23 17:09:27
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kbxfksi

新虫 (初入文坛)


其实就是氧化的问题存在,2-巯基乙醇是还原剂,减少氧化就行了
8楼2014-07-24 10:19:00
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yuanziren

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by kbxfksi at 2014-07-24 10:19:00
其实就是氧化的问题存在,2-巯基乙醇是还原剂,减少氧化就行了

可是我的体系中加了DTT和PMSF
9楼2014-07-30 09:51:34
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