应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白变性
51/1返回列表
查看: 1332  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liushuizhf

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白变性

本人在做蛋白纯化，蛋白C端加有6个His标签，N端加有信号肽，目的蛋白分泌到发酵液里，现在一直纯化不到目的蛋白，怀疑是不是His标签被包裹在蛋白里，想通过蛋白变性以达到纯化的目的，100℃煮发酵液可不可以啊，谁做过相关内容，请赐教啊！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-07-30 10:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liushuizhf(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-30 15:56:00
liushuizhf: 金币+2 2013-10-08 08:44:26
你的纯化目的是什么，如果下步是测酶活的话，你煮了，酶不是都挂掉了。你确定是分泌到发酵液中，你应该先SDS-PAGE一下，甚至westernblot，确定有表达，然后确定在哪里
赞一下(1人) 回复此楼
越学越无知
3楼2013-07-30 13:59:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liushuizhf(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-30 15:55:53
liushuizhf: 金币+2 2013-10-08 08:44:12
感觉楼主刚刚开始做纯化吧，肯定不能100度煮的啊。。。。你的发酵液是大肠吗还是酵母？？你应该吧分离下破碎的细胞上清和沉淀先看一下蛋白到底在哪里啊~也有可能根本没有表达呢
赞一下(1人) 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2013-07-30 12:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liushuizhf

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-07-30 12:58:23
感觉楼主刚刚开始做纯化吧，肯定不能100度煮的啊。。。。你的发酵液是大肠吗还是酵母？？你应该吧分离下破碎的细胞上清和沉淀先看一下蛋白到底在哪里啊~也有可能根本没有表达呢

恩，是的，我做的的发酵液是黑曲霉的发酵液，蛋白不确定就一定分泌到发酵液了，但是破碎的细胞上清和沉淀都没有明显目的条带，发酵液有疑似目的条带，但一直纯化不到，我的蛋白不需要活性，但容易降解，所以想按照变性蛋白的条件做一遍，不知道有什么好的方法没可以使蛋白变性？
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-30 14:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草蔻年华

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-07-31 14:11:51
liushuizhf: 金币+2 2013-10-08 08:45:05
还真没碰到过蛋白会分泌到体外的情况。。跑蛋白电泳的时候发酵液的上样量是多少？条带明显不明显？用盐酸胍可以变性，但是不是简单的加入进去就行。是要一定浓度的。而且不仅仅是盐酸胍还需要加别的钠盐。另外尿素是在后面让蛋白梯度复性的时候用到的，有用尿素来变性的吗？这点不是很清楚。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-07-31 13:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:33 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:22 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:18 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:25 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-30 00:59 by winsaint
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭