应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菌液pcr
172/2返回列表上一页12
查看: 1001  |  回复: 16
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhoutianhe at 2013-07-30 11:35:43
负对照？？用的是1微升的菌液...

负对照就是用其他菌为模板或者直接用水为模板P，看PCR系统是否有污染。我觉得筛选直接用菌落PCR就很方便，为什么要摇菌做菌液PCR？
赞一下 回复此楼
11楼2013-07-30 23:17:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmaclhf

铁虫 (小有名气)
建议你把质粒提出来做个PCR就好了~菌液PCR是会出现假阳性的·
赞一下 回复此楼
12楼2013-07-31 09:00:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议用载体上的通用引物扩增，然后提质粒双酶切鉴定，另外，在提交测序单子时可以注明存在高级结构，应该能测出来
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2013-07-31 09:17:19
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一树春天

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wodehao110 at 2013-07-30 22:41:53
会不会pcr温度太低了，导致非特异条带多。

非特异性条带应该是退货温度太低的原因
赞一下 回复此楼
14楼2013-08-01 14:28:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一树春天

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
实在不行你提个质粒 跑胶看大小 确定是不是连上了
赞一下 回复此楼
15楼2013-08-01 14:31:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoutianhe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yuanbo934 at 2013-07-31 09:17:19
建议用载体上的通用引物扩增，然后提质粒双酶切鉴定，另外，在提交测序单子时可以注明存在高级结构，应该能测出来

以前直接pcr的测序说有高级结构无法测，难道克隆过后就能测出来？？、
赞一下 回复此楼
16楼2013-08-03 18:59:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhoutianhe at 2013-07-30 10:10:53
没有我要的条带，我回收之前的条带，如图，当时我的退火温度是62.3，但是克隆过后用62.3什么都没有p出来，然后用的50度，就是之前这种多条带了，引物都是用一样的引物

JE_$3W$}3YR$B0N)EO7J)CB.jpg
...

之前PCR用的温度能出来的话，换了模板也任然能够P出来，没必要换温度。下次做菌液的时候试试将菌液离心沉淀，然后用水重悬，以出去LB培养基试试看，有些公司的LB成分对PCR影响蛮大。同时做个minpre，将质粒提出来后，用质粒做模板进行PCR，同时做个酶切，double check 一下，一般都不会有问题的，Good luck！
赞一下 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
17楼2013-08-03 20:41:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhoutianhe 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭