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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌液pcr

大家帮我看看这个菌液pcr，是怎么回事？怎么有两条条带，而且左起第三个，和第六个都是蓝斑，怎么也有两个条带？
菌液pcr
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1楼 2013-07-30 09:09:08
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhoutianhe at 2013-07-30 10:10:53
没有我要的条带，我回收之前的条带，如图，当时我的退火温度是62.3，但是克隆过后用62.3什么都没有p出来，然后用的50度，就是之前这种多条带了，引物都是用一样的引物

JE_$3W$}3YR$B0N)EO7J)CB.jpg
...

之前PCR用的温度能出来的话，换了模板也任然能够P出来，没必要换温度。下次做菌液的时候试试将菌液离心沉淀，然后用水重悬，以出去LB培养基试试看，有些公司的LB成分对PCR影响蛮大。同时做个minpre，将质粒提出来后，用质粒做模板进行PCR，同时做个酶切，double check 一下，一般都不会有问题的，Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
17楼2013-08-03 20:41:18
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2464514082

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-30 09:28:22
可能是出现非特异性条带了，你两条带里有目的条带吗？
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2楼2013-07-30 09:25:19
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+3, 对照很有必要 2013-07-30 15:00:50
下次用浓度高一点的胶，你mark都没有跑开。
你得到3条带，不知你目的大小是多少，下次用空菌和空载做个对照. Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
3楼2013-07-30 09:43:42
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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-30 09:43:42
下次用浓度高一点的胶，你mark都没有跑开。
你得到3条带，不知你目的大小是多少，下次用空菌和空载做个对照. Good luck！

没有我要的条带，我回收之前的条带，如图，当时我的退火温度是62.3，但是克隆过后用62.3什么都没有p出来，然后用的50度，就是之前这种多条带了，引物都是用一样的引物
菌液pcr-1
JE_$3W$}3YR$B0N)EO7J)CB.jpg
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4楼2013-07-30 10:10:53
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