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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌液pcr

大家帮我看看这个菌液pcr，是怎么回事？怎么有两条条带，而且左起第三个，和第六个都是蓝斑，怎么也有两个条带？
菌液pcr
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1楼 2013-07-30 09:09:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wodehao110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会pcr温度太低了，导致非特异条带多。
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10楼2013-07-30 22:41:53
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议用载体上的通用引物扩增，然后提质粒双酶切鉴定，另外，在提交测序单子时可以注明存在高级结构，应该能测出来
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13楼2013-07-31 09:17:19
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普通回帖

2464514082

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-30 09:28:22
可能是出现非特异性条带了，你两条带里有目的条带吗？
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2楼2013-07-30 09:25:19
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+3, 对照很有必要 2013-07-30 15:00:50
下次用浓度高一点的胶，你mark都没有跑开。
你得到3条带，不知你目的大小是多少，下次用空菌和空载做个对照. Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
3楼2013-07-30 09:43:42
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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-30 09:43:42
下次用浓度高一点的胶，你mark都没有跑开。
你得到3条带，不知你目的大小是多少，下次用空菌和空载做个对照. Good luck！

没有我要的条带，我回收之前的条带，如图，当时我的退火温度是62.3，但是克隆过后用62.3什么都没有p出来，然后用的50度，就是之前这种多条带了，引物都是用一样的引物
菌液pcr-1
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4楼2013-07-30 10:10:53
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wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很可能插入的序列不是你的目的条带。建议做酶切或者测序验证一下。
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5楼2013-07-30 10:31:25
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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangweida2 at 2013-07-30 10:31:25
很可能插入的序列不是你的目的条带。建议做酶切或者测序验证一下。

酶切没做过，公司说序列有高级结构，测不出来
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6楼2013-07-30 10:47:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液PCR做负对照了吗，用了多少菌液P的？会不会是菌液多了，跑出菌的质粒或者RNA了？
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7楼2013-07-30 11:13:55
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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-30 11:13:55
菌液PCR做负对照了吗，用了多少菌液P的？会不会是菌液多了，跑出菌的质粒或者RNA了？

负对照？？用的是1微升的菌液
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8楼2013-07-30 11:35:43
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zhoutianhe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-30 11:13:55
菌液PCR做负对照了吗，用了多少菌液P的？会不会是菌液多了，跑出菌的质粒或者RNA了？

请问，各位怎么检测目的片段连接上了载体？怎么验证载体进入了感受态？怎么验证连有目的条带的质粒进入了感受态呢？
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9楼2013-07-30 21:58:00
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